PCR产物和质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分析.pptVIP

凝胶成像系统 电泳槽结构 操作步骤 琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 加样：加样端为负极（黑） 电泳：5V/cm 观察：紫外灯下观察，照相 溶 胶 准备胶槽 凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml 注意观察溴酚蓝染液的迁移 紫外灯下观察电泳结果 照 相 2、1 kb DNA Ladder不能对DNA质量进行精确定量分析，但可以通过与相近的条带进行比较估算出大概的数据。每条带大致的量如下（按0.5μg上样量计。应按13条带计算，因为3kb的量是其它片段量的近三倍）： 片段 碱基对 质量 1 10,002 42 ng 2 8,001 42 ng 3 6,001 50 ng 4 5,001 42 ng 5 4,001 33 ng 6 3,001 125 ng 7 2,000 48 ng 8 1,500 36 ng 9 1,000 42 ng 10a 517 42 ng* 10b 500 42 ng* 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * PCR产物和质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分析 电泳： 是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象 正极 负极 带负电粒子 带正电粒子 实验原理 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系 DNA的分子量 DNA的构象* 琼脂糖浓度 * 影响琼脂糖电泳迁移率的主要因素 分子量Marker DNA (EcoRI Hind III) 100 bp Marker 1kb Marker DNA Marker 1、 DL2000 不同构像质粒 质粒的电泳 质粒DNA的3种形式泳动速度:超螺旋线性开环 质粒DNA的存在形式有3种: 1、共价闭环DNA:常以超螺旋形式存在 2、开环DNA:质粒DNA两条链中有一条发生一处或多处断裂，因此可以自由旋转从而消除张力,形成松弛的环状分子 3、线性DNA:因质粒DNA的两条链在同一处断裂而造成. 开环 超螺旋 线性 琼脂糖含（%） DNA片段的有效分离范围(kb) 0.3 5-60 0.5 1-30 0.6 1-20 0.7 0.8-12 1.0 0.5-10 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3 分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度 琼脂糖凝胶中DNA的观察 溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光 主要实验器材 电泳仪 电泳槽 缓冲液 琼脂糖 凝胶槽 梳子 取液器 溴酚蓝 凝胶电泳槽 铺 胶 凝胶凝固后取出梳子 加缓冲液 准备样品 点 样 电 泳 *