線粒体中DNA聚合酶的表达缺陷会导致小鼠过早老化.docVIP

线粒体中DNA聚合酶的表达缺陷会导致小鼠过早老化 原作者：Aleksandra Trifunovic, Anna Wredenberg, Maria Falkenberg,Johannes N.Spelbrink, Anja T.Rovio, Carl E.Bruder,Mohammad Bohlooly-Y, Sebastian Gidlof, Anders Oldfors,Rolf Wibom, Jan Tornel, Howard T. Jacobs Nils-Goran Larsson, 翻译人：朱奕彰 完成日期：11月17号 学号：1110305106 一、摘要： 人类，猴子和啮齿动物的衰老过程中线粒体DNA（mtDNA）的点突变和缺失在各种组织中都有累积。这些突变是不均衡分布的而且可以在某些细胞中克隆性积累例如心脏，骨骼肌和脑等组织并导致嵌合型呼吸链缺陷疾病，以衰老过程而言，它们可能出现的因果效应已经被广泛激烈的讨论过因为其丰度较低而且仅与衰老相关联。我们通过建立具有表达校读缺陷的PolgA（核编码的mtDNA多聚酶催化亚单位）的纯合基因敲入小鼠实验来说明这个问题。研究之后我们发现基因敲入小鼠形成了mtDNA突变基因型，并且其mtDNA点突变增加了3-4倍，缺失也增加不少。这种体细胞mtDNA突变的增加与寿命减短和提早出现衰老相关的表型如体重降低，皮下脂肪减少，秃顶（脱毛发），脊柱后突（脊柱弯曲），骨质疏松，贫血，生育力下降和心脏增大相关。我们的实验结果分析出了哺乳动物中mtDNA突变和衰老表型之间的因果关系。 二、关键词： 线粒体DNA多聚酶，表达缺陷，mtDNA突变，早衰。 三、正文： 酵母和动物细胞中的线粒体DNA聚合酶有一种内在的3’ -5 ‘外切酶活性，合成mtDNA9 - 11的校对mutNeo）基因，并获得了这种等位基因的种系传播（图1C，D）。下一步，我们切除了PolgA两侧的与新霉素抗性有关基因并与杂合子PolgA（mutNeo）基因小鼠交配，结果表达出了FLP – 重组酶，从而产生杂合子PolgA(mut)（+/ PolgA(mut)）小鼠（图1a，C，D）。因为别人做的实验都显示新霉素抗性基因的存在可以产生亚等位基因的形成，故我们选择对其执行体内新霉素抗性基因切除手术。最后，我们通过其与+/ PolgA（mut）小鼠进行杂交以产生纯合子的基因敲定小鼠（PolgA（mut）/ PolgA（mut）），以下简称记“线粒体DNA的增变基因”小鼠。 我们在体外分析了重组线粒体的DNA聚合酶全酶复合物，发现线粒体DNA聚合酶包含的PolgA亚基中的门冬酰胺突变为丙氨酸，并且此突变位于其外切酶结构域中，对外切酶的活性减少起到了深刻的影响（图1E）。有其他证据表明，酵母中某些核酸外切酶的部分结构缺陷会减弱线粒体DNA聚合酶合成DNA的能力。然而，生化分析与重组分析发现对于线粒体DNA聚合酶有核酸外切酶缺陷的小鼠（图1F）或提取了线粒体敲定基因的杂合子（+/ Polg（mut））小鼠或线粒体DNA上具有增变基因小鼠（图1G）来说，它们的活动中均未出现DNA聚合酶减少的现象。 那些线粒体DNA的具有增变基因的小鼠，直到发育到大约25周的年龄时才开始有正常的外观，但与此同时我们也第一次注意到其背部有轻微后凸和全身脱发现象，并发现随着小鼠的老去其后凸的程度与脱发的程度成正比（图2a）。线粒体DNA中具有增变基因的小鼠寿命中位数为48周，并所有小鼠都在61周前死亡（图2E）。线粒体DNA具有增变基因的小鼠一开始体重增加，并随时间变化增加速度不断变慢，而从15 - 20周的时候开始，小鼠体重开始降低（即出现负增长），也有人说是从24周开始的，这个差异与实验结果没有太大关系（图2F，G）。在人体衰老过程中脱发是很常见，此外，体重下降这种情况对于 年龄超过60岁的老年人和年龄超过1.5年小鼠中都是有据可查的。 我们用X射线密度仪对小鼠全身的各方面指标进行定量评估（图2c）或解剖股骨骨头对其骨矿物质密度（BMD）进行了比较（图2d）。经过测量发现，体重偏轻的小鼠其身体的各部分比例长度是正常的，而mtDNA中具有增变基因的小鼠（图2c）其脂肪含量减少，符合其整体外观（图2a）并且与皮下脂肪组织学分析结果一致（图2b）。而在人类中，也有相似的情况，即当人们超过65岁后随着年龄的增长皮下脂肪开始出现明显减少，这是很常见的皮肤老化现象之一。而在骨矿物质密度（BMD）的比较试验中，人们发现随着年龄的增大线粒体DNA具有增变基因的小鼠（图2c）其骨中矿物质密度（BMD）不断降低，并