纖维素酶活性测定.docVIP

纤维素酶活性测定 技术报告 NERL/TP-510-42628 2008年1月 实验室程序分析 发行日期：1996年8月12 日 B. 阿德尼和J. 贝克 科罗拉多州科尔大道戈尔登国家可再生能源实验室1617， 80401-3393303-275-3000? 美国能源部办公室的能源效率和可再生能源由中西部研究所?巴特尔主持。合同号：DE - AC36 - 99 - GO10337 免责声明 这些标准的生物分析方法是由美国国家可再生能源实验室，这由美国中西部研究所为能源部（“核磁共振”）。获得和使用这些方法不得对用户的以下义务该用户被授予的权利，没有任何费用或成本，除提供，商业销售，无论任何目的使用，复制，修改，改变，提高和分发这些方法，这整个通知在所有方法的副本。此外，用户同意信贷国家再生能源实验室 MRI）在任何出版物这些方法的使用。国家再生能源实验室 MRI）检查，但不得用于任何广告或宣传或推广除非有具体的产品或商业机构的书面许可，是从国家再生能源实验室 MRI）通过检查。用户还了解到，国家再生能源实验室 MRI）是没有义务提供任何支援，咨询，培训或任何形式的援助，对于这些方法的使用或提供任何更新，修订或新版本。这些方法是由国家再生能源实验室磁共振成像“原样”及任何明示或暗示保证，包括但不限于暗示的保证适销性和特定用途的适用性担保。任何情况下，国家再生能源实验室 MRI）检查均不对任何特殊间接或间接损害或任何赔偿责任，包括但不仅限于数据或利润的损失请求权，这结果在合同疏忽或其他侵权索赔行动而引致的或与访问使用或执行相关这些方法1。简介1.1下面的方法介绍了纤维素酶的活性测定过程采用国际纯粹与应用化学的指导方针该已被设计用来测量在“过滤条件纤维素酶的活性单位”（FPU）的原始酶液。对于酶制剂的定量结果进行比较，必须在此基础上重要的和平等的转换。2.0毫克血糖值从50毫克的过滤纸在60分钟（4％的转换）已被指定为计算所的IUPAC的滤纸纤维素酶单位（FPU）的拦截还原糖。1.2这是极为重要的要记住FPU的定义在这个意义上转换。糖产量不是的混合物线性函数酶的数量，由高斯讨论（1987年），两酶不会相等的时间被预期。因此该检测程序需要找到一稀释原酶，一个0.5毫升稀释在60分钟内4％（或者，在实践中，发现两个稀释支架上的4％转换点，使密切合作，所需的稀释可以得到合理的精度，插值），然后计算稀释要求原活动（浮点运算单元/毫升）。进一步评价所需的计算，其重要意义，要在附录中找到。1.3测定混合物时，可能在某些情况下含有还原糖与底物蔗糖水解酶。将发酵液的检测纤维素酶可能含有营养糖，纤维素和还原端基体聚合物的有时在任何酶的攻击是可以衡量葡萄糖量。出于这个原因，控制包括酶无需底物和酶的底物不包括所有酶检测值与样品空白值的任何修正。。范围2.1本程序只用于浮点运算单元在一个适当的活性测定纤维素酶的制备过程的IUPAC定义如上所述。3。参考文献3.1高斯，T.K. 1987。 “测量纤维素酶的活动。”纯净。化学。59：257-268。 “利用二硝基水杨酸试剂测定还原糖。”化学。31:426-428。???4。意义和使用4.1这个步骤根据IUPAC（国际理论和应用化学联合会）理论，决定了在纤维素酶的准备工作中酶活动的滤纸功效。 5。 5.1保持在500C范围内的水浴。 5.2 能测量540nm吸光度的分光光度计。 6。 6.1蒸馏水 1416ml 二硝基水杨酸 10.6g 氢氧化钠 19.8g 混合溶解上述物质，然后添加罗谢尔盐 306g 苯酚 7.6ml（在500C时溶解） 焦亚硫酸钠 8.3g 将3ml样品混合着0.1N盐酸滴到酚酞的末端，它将需要5-6ml盐酸，如果需要，添加氢氧化钠。 6.2柠檬酸盐缓冲溶液：对于里氏木霉纤维素酶，在PH值为4.8的0.05M柠檬酸盐缓冲溶液中执行纤维素酶鉴定。 对于其他纤维素酶，PH值和温度可能会不同。当报告结果时，鉴定的条件一定是明确的。 柠檬酰胺 210g 去离子水 750ml 添加氢氧化钠直至PH为4.3 在溶液中加水冲淡至1L，然后测其PH。如果需要，在溶液中加入氢氧化钠至PH值为4.5.当1M柠檬酸盐缓冲溶液用水冲淡至50mM，那么它的PH应该为4.8.在冲淡柠檬酸钠缓冲溶液至PH为4.8时，检测和适应它。 7。 7.1追随合适的特定的卫生计划方针的NREL实验室。 7.2 当使用有毒的，腐蚀的苯酚时，一定要小心。 8。 8.1通过类似的和完全相同的三类试验方法发现的糖苷键分裂为下面讲述的细节作了准备。这种酶作用物是一种高级滤纸条（1.0cm*6.0cm）。 8.2酶的试管化验 8.2.1在每个13*100的试管中放置一张卷的滤纸。 8.2.2 将1.0ml，