重庆市高考生物 复习考点五 PCR技术的基本操作和应用 新人教版选修1.docVIP

重庆市万州分水中学高考生物 复习考点五 PCR技术的基本操作和应用 新人教版选修1 1．PCR原理 DNA热变性原理，即： 2．PCR反应过程 (1)变性：当温度上升到90_℃以上时，双链DNA解聚为单链。 (2)复性：温度下降到55_℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 (3)延伸：温度上升到72 ℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 易错警示　(1)DNA分子复制的人工控制 解开螺旋：在80～100 ℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。 恢复螺旋：在50 ℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。 复制条件：缓冲液、DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶和两种引物。 反应场所：PCR仪。 (2)PCR技术中的引物：①含义：引物是一小段单链DNA或RNA分子。②作用：为DNA聚合酶提供合成的3′端起点。③种类：扩增一个DNA分子需要2种引物。④数目：引物数目等于新合成的DNA子链数目。⑤与DNA母链的关系：两种引物分别与DNA母链的3′端通过碱基互补配对结合。 3．多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。请回答下列有关PCR技术的基本原理及应用问题： (1)DNA的两条链是反向平行的，通常将________________的末端称为5′端，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的____________开始延伸DNA链。 (2)PCR利用DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，但又导致了DNA聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代，科学家从一种Taq细菌中分离到__________________________________，它的发现和应用解决了上述问题。要将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来，所用的培养基叫______________。 (3)PCR的每次循环可以分为______________________三步。假设在PCR反应中，只有一个DNA片段作为模板，请计算在5次循环后，反应物中大约有________个这样的DNA片段。 (4)请用简图表示出一个DNA片段PCR反应中第二轮的产物。 (5)简述PCR技术的主要应用。 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 答案　(1)磷酸基团　3′端　(2)耐高温的Taq DNA聚合酶　选择培养基　(3)变性、复性和延伸　32 (4)如图所示 (5)遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定(要求3项以上) 解析　(1)DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已经存在的核酸的3′-羟基上，与DNA母链结合的引物就提供这个羟基。 (2)因PCR利用了DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，所以用于催化DNA复制过程的DNA聚合酶要具有耐高温的特性。用选择培养基可将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来。 (3)DNA复制时两条链均作为模板，进行半保留复制，所以复制5次后得到的子代DNA分子数为25＝32个。 (4)新合成的DNA链带有引物，而最初的模板DNA的两条链不带有引物。 (5)PCR技术可以对DNA分子进行扩增，所以可用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等方面。 1．细胞内DNA复制与PCR技术的比较 细胞内DNA复制 PCR不同点 解旋 在DNA解旋酶作用下，边解旋边复制 80～100 ℃高温解旋，双链完全分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温相同点 ①需提供DNA复制的模板②四种脱氧核苷酸为原料③子链延伸的方向都是从5′端到3′端 2．PCR的反应过程 (1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链，如下图： (2)复性：温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图： (3)延伸：温度上升到72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图： 考点四　血红蛋白的提取和分离 1．血红蛋白的提取和分离原理及方法 (1)原理：蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 (2)分离方