《精》试验一、二培养基的配制与灭菌2.pptVIP

实验一、培养基的制备 目的要求 ??? 1.明确培养基的配制原理。 ???2.通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。 （一）实验原理 按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质人工配制而成的营养基质称培养基。 培养基（medium），适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。 根据制备培养基对所选用的营养 物质的来源，可将培养基分为三类: 1、 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质：牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 2、淀粉培养基 淀粉培养基（高氏Ⅰ号培养基）是合成培养基，用来培养和观察放线菌形态特征。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，如：KNO3 ，K2HPO4 ，MgSO4 ，NaCl ，FeSO4等，有的合成培养基还要补加微量元素。 3、马丁氏培养基 主要是真菌生长所需要的碳源、氮源、无机盐、维生素等成分，均来自天然成分，也有化学成分。马丁氏是一种用来培养霉菌的培养基。 4、 YPD培养基 YPD 或YPED，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基。主要用于酵母菌的培养。 （二）实验方法 计算 → 称量 → 熔化 → 调pH （过滤） →分装 →灭菌 l、配制牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏 3.0克 蛋白陈 10.0克 NaCl 5.0克 自来水 1000毫升 琼脂 16-18克(固体) pH 7.4—7.6 灭菌 121℃, 20-30分钟 2. 高氏I号培养基 可溶性淀粉 20. 克 KNO3 1克 K2HPO4 0.5克 MgSO4﹒7H20 0.5克 NaCl 0.5克 FeSO4 0.01克 蒸馏水 1000毫升 琼脂 16-18克(固体) 先用少量蒸馏水将淀粉溶化，然后再加盐类。pH调至7.6—7.8。 3、马丁氏培养基 KH2PO4 1克 MgSO4﹒7H20 0.5克 蛋白陈 5克 葡萄糖 10克 琼脂 16-18克(固体) pH值自然，培养液1000ml加1%孟加拉红3.3ml. 4、 YPD培养基 配方： 酵母膏 1% 蛋白胨 2% 葡萄糖） 2% 琼脂粉 16-2% pH值自然 实验二、培养基的灭菌 目的要求?? 1.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用。 2、掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。 3、了解干热灭菌的原理和应用，掌握干热灭菌的操作技术。 4、了解紫外线灭菌的原理和方法 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。 分类：1、卧式 2、立式 具体操作步骤： （1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线） （2）摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果 （3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋） （4）打开放气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽）关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（15磅/时2）控制热源维持所需时间（20分钟）然后停止加热，让其自然冷却。 （5）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。 注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致