【2017年整理】化验技术协会第五期培训资料2.doc

**************************************** 化验技术协会第五期培训资料 （微生物检定工） **************************************** 抗生素微生物检定法 1 简述 抗生素微生物检定法系在适宜条件下，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性(效价)的方法。依试验设计原理不同，可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。后二者被列为抗生素微生物检定的国际通用方法。中国药典也采用这两种方法。 抗生素微生物检定管碟测定法系琼脂扩散法，是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径(面积)呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。 抗生素微生物比浊法是将一定量的抗生素加至接种有试验菌的液体培养基内，混匀后，经培养，测量培养基的浊度。此法系根据抗生素在一定的浓度范围内，其浓度或浓度的数学转换值与试验菌生长产生的浊度(浊度与细菌数量、细菌群体质量及细菌细胞容积的增加之间存在直接关系)之间存在线性关系而设计，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，计算出供试品的效价。 抗生素效价以“单位(u)”或“微克(μg)”表示。 抗生素管碟测定法 2 仪器与用具 2.1 操作室 光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化(空气净化级别为lOO级～10,000级)及空调设备，控制室温在20～25℃之间，达到无菌或半无菌状态。操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。注意操作，避免室内抗生素污染。 2.2 双碟 内径约90mm，高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。 碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一张白纸，碟内加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。 用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后，置清洗液中浸泡过夜，冲洗，沥干，置150℃～ 160℃干热灭菌2小时或高压121℃蒸气灭菌30分钟，备用。 2.3 陶瓦盖 内径约103mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥或干热灭菌。 2.4 钢管 内径(6.0±0.1)mm，高(10.O±0.1)mm；外径(8.0±0.1)mm或(7.8±0.1)，每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端面光洁平坦，管壁厚薄一致。每次使用后应置1：1000新洁尔灭溶液内，浸泡2小时以上，灭菌后再洗涤，先用水洗涤，超声波超声30分钟或用沾有去污粉的纱布条串擦内外壁，水冲洗，沥干，再用蒸馏水冲洗3次后，置带盖 的容器内，在150℃～160℃干热灭菌2小时，备用。 2.5 钢管放置器 有6孔和4孔两种。放置于无菌或半无菌室的操作平台上，钢管下落时应垂直平稳、位置正确。双碟升降平稳。应保持清洁，防止抗生素污染。可定期用75％乙醇棉擦拭落管筒及储管杯。置钢管的玻璃管应定期干烤灭菌。 2.6 恒温培养箱 以隔水式为宜，温度平稳，波动小。设置漂移温度为35～37℃或24～26℃，依各品种要求而定，箱内网状隔板上放置带孔的玻璃板并调整水平。 2.7 灭菌刻度吸管 用于吸取菌液及培养基。使用后应立即置5％石炭酸或1：1000新洁尔灭溶液中消毒后，再按玻璃容器的常规洗涤法洗涤。洗涤沥干后在吸口处塞入脱脂棉(松动，透气)，置适宜容器中，在120℃以上干热灭菌2小时或121℃蒸气灭菌30分钟，烘干备用。 2.8 玻璃容器 包括定量移液管、刻度吸管、容量瓶等，均应符合“常用玻璃量器国家计量检定规程”的规定。每次使用前用清洁液浸泡，水冲洗，并用蒸馏水或去离子水冲洗3次，沥干。 2.9 称量瓶 重量在10g以下。用毕先用水冲洗、沥干，置清洁液浸泡2小时以上，然后 分别用水、蒸馏水或去离子水冲洗3次，置洁净平皿中，在120℃干热灭菌3小时，待冷至60℃～70℃时，取出置于干燥器中备用。 2.10 滴管 用玻璃管拉制，管口光滑。使用前在清洁液浸泡，分别用水、蒸馏水或去离子水冲洗3次，置适宜容器中，在120℃干燥3小时后备用。 2.11 天平 分析天平，精密度0.1mg，经计量检定。 2.12 抑菌圈直径(面积)测量仪 应符合“抑菌圈测量仪检定规程”的规定。 2.13 游标卡尺 精度0.05mm，长度125mm。 2.14 超净工作台 有效工作面局部洁净度100级。用于试验菌的接种传代或菌悬