第1章结构鉴定4CE、XA.pptVIP

8毛细管电泳 毛细管电泳(Capillary Electrophoresis，CE)是80年代初迅速发展起来的一种新型的电泳与色谱相结合的分离分析技术，具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、应用范围广等特点，已成为现代重要的分离分析手段，在生物、化学、医药、环保、食品等领域具有很好的应用前景。 特点：以电泳或电渗作为分离的主要动力，以类似于色谱柱的毛细管作为分离管，同时具有电泳的高分离效率和现代色谱的快速、在线检测、自动操作等特点。 基础：电泳和色谱的技术与理论。 所谓电泳就是带电粒子或离子在电场的作用下作定向移动。 1809年，俄国物理学家Peace首次发现电泳现象。 1937年，瑞典科学家Tiselius首先将电泳作为分离技术，创造了Tiselius电泳仪，首次从人血液中分离出五种蛋白，并于1948年获得诺贝尔化学奖。分辨率有限，而且产生的焦耳热会引发对流，导致区带扰乱。 50年代以后，出现了各种抗对流支持介质：滤纸、醋酸纤维、琼脂凝胶和淀粉凝胶的区带电泳。 1959年，Raymond和Weint利用人工合成的凝胶作为支持介质，创造了聚丙烯酰胺凝胶电泳，极大地提高了区带电泳的分辨率。广泛地应用于生物大分子的分离。 1981年，Jorgenson和Lukacs，使用75μm内径100cm长的玻璃毛细管在30kv的高电压下进行电泳，获得了数十万理论板数的高分离效率，使该技术有了突破性进展。 1989年以后，毛细管电泳商品仪器及高灵敏度在线检测器。 应用范围广：最初认为它主要用于生物大分子的分析，现已经证明它能用于氨基酸、手性药物、维生素、农药、无机离子、有机酸、染料、表面活性剂、肽和蛋白质、碳水化合物、低聚核苷酸和DNA片段，甚至整个细胞和病毒粒子的分离。 本章内容简单介绍毛细管电泳，主要阐述毛细管凝胶电泳在生物高分子分析中的应用。 8.1毛细管电泳分类及特点8.1.1分类 按分离原理不同电泳可分为四种类型，分离原理见图。 1、区带电泳(Zone Electrophoresis)：不同的溶质在均一的缓冲溶液(或称载体电解质)系统中分离成独立的区带，如果用光密度计扫描可得出一个个互相分离的峰，与洗脱色谱的图形相似。电泳的区带随时间延长扩散严重，影响分辨率。以凝胶作为载体电解质时，抑制了组分扩散，又兼有分子筛的作用，故分辨率大大提高，应用最广。 2、移界电泳：只能起到部分分离的作用，如将浓度对距离作图，则得出一个个台阶状的图形，与色谱法前沿分析的图形相似。最前面的成份是纯的，其他则互相重叠，各界面可用光学方法显示，这是Tiselius最早建立的电泳方法。  3、等速电泳：样品离子置于前导和终末电解质之间，在电泳达到平衡后，各迁移率不同的离子前后相随，以等速移动。按浓度对距离作图也是台阶状，但异于移界电泳，它的区带没有重叠，而是依次排列。 4、等电聚焦：被分离的离子和两性电解质溶液混合装入毛细管，在电场的作用下，不同等电点的两性载体电解质自动形成pH梯度，被分离离子各自移至其等电点，形成很窄的区带。分辨率很高。 毛细管电泳是指所有在极细毛细管内进行的电泳，根据分离原理的不同，分为五种不同的分离模式： 自由溶液毛细管电泳(Free Solution Capillary Electrophoresis，FSCE) 毛细管胶束电动色谱(Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MECC) 毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis，CGE) 毛细管等电聚焦(Capillary Isoelectric Focusing，CIF) 毛细管等速电泳(Capillary Isotachophoresis，CITP)。 各分离模式所要求的载体电解质和分类见表。 8.1.2毛细管电泳与常规电泳比较 电泳分离是基于溶质组分在电场下的迁移率不同而进行的。 Tiselius电泳，分离效率受对流影响，而抗对流介质如聚丙烯酰胺或琼脂凝胶又影响速度。平板和管状凝胶主要用于生物分子的分离。平板凝胶电泳最常用，但存在分析时间长、分离效率低、检测灵敏度低、分析结果难以保存、自动化程度低等缺点。 毛细管电泳是一种仪器分析方法。 毛细管本身抗对流。用毛细管代替平板凝胶进行电泳类似于用色谱柱代替薄层色谱。 毛细管电泳各种分离模式的发展，扩大了电泳的应用范围，电泳不再局限于大分子的分离，也能用于小分子离子，及阴、阳离子和中性分子的同时分析。 8.1.3毛细管电泳与高效液相色谱比较 毛细管电泳是色谱和电泳相结合的分离分析技术，与目前广泛使用的高效液相色谱相(HPLC)相比有许多异同点。 8.1.4毛细管电泳特点 1.电泳在细内径（25～75 μ m）的石英毛细管中进行； 2.毛细管中缓