【2017年整理】精制抗蛇毒血清制造及检定规程.docx

精制抗蛇毒血清制造及检定规程 本品系蛇毒或脱毒蛇毒免疫马的血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制成的抗蛇毒球蛋白制剂，能中和相应蛇毒，用于治疗被相应毒蛇咬伤之患者。 1　制造 1.1　对血浆的要求 1.1.1　用于制造精制抗蛇毒血清的血浆应符合附录1《抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法》的规定。 1.1.2对血浆效价的最低要求如下： 血浆种类 每瓶血浆效价（U/ml） 蝮蛇 150 五步蛇 50 银环蛇 200 眼镜蛇 12 1.2　制造程序 按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.2项进行。 1.3　对制造工艺的要求及规定 按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.3项进行。 1.4　半成品检定 由制造部位进行理化检定、无菌试验、安全试验、热原质试验、类A血型物质测定及效力试验。热原质试验、类A血型物质测定及效力试验可与质量检定部门会同进行。检定方法及要求同成品检定。 2　成品检定 由质量检定部门进行全面检定，半成品已会同检定的项目可抽检。 2.1　鉴别试验 按《精制抗毒素制造及检定规程》2.1项进行。 2.2　理化检定 按《精制抗毒素制造及检定规程》中2.2项进行 2.3　无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。 2.4　安全试验 按《精制抗毒素制造及检定规程》2.4项进行。 2.5　热原质试验 按《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量为3ml/kg。判定标准按该规程4.1项要求进行。 2.6　类A血型物质测定 按《精制抗毒素制造及检定规程》2.6项进行。 2.7　效价测定 2.7.1　效价测定方法见附录2。 2.7.2对各种抗蛇毒血清成品的最低效价要求如下： 抗血清种类 血清效价（U/ml） 蝮蛇 500 五步蛇 180 银环蛇 800 眼镜蛇 100 3　保存与效期 保存在2～8℃。自效价测定合格之日起，液体血清效期为3年，冻干血清效期为5年。 附录1　抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法 1　马匹 1.1　用于免疫采血之马匹必须符合《生物制品生产用马匹检疫及管理规程》的规定。 1.2　马匹开始免疫前可做破伤风预防注射。 1.3抗蛇毒血清生产用马匹，如解剖确诊为蛇毒中毒死亡者，应将尸体焚毁或深埋。 2　抗原与佐剂 2.1　免疫用蛇毒抗原选用蛇毒或脱毒蛇毒。 2.2　用作免疫之蛇毒毒素必须经除菌处理。 2.3　蛇毒应于2～8℃真空干燥保存。免疫抗原为配制稀释成一定浓度的蛇毒液。 2.4凡接触蛇毒之用具，用前用后都应煮沸消毒，手有创伤者，操作时应有保护措施。 2.5　免疫用佐剂应符合《精制抗毒素制造及检定规程》附录1中的有关要求。 3　免疫与采血 3.1　马匹免疫采血按《抗毒素生产马匹免疫方法》中的要求及规定进行。 3.2　基础免疫、超免疫 根据基础免疫情况，制定超免疫计划。免疫注射量应逐渐递增，可视注射反应而定。 3.3　采血 经试血效力试验合格之马匹可进行采血，其血清的效价不得低于下列要求。分离之血浆加适宜防腐剂（如0.5%苯酚）。 抗血清种类 采血要求最低效价（U/ml） 抗蝮蛇毒 180 抗五步蛇毒 60 抗银环蛇毒 300 抗眼镜蛇毒 15 4　效价测定 效价测定方法见附录2。 附录2　抗蛇毒血清效价测定方法（小白鼠试验法） 1　试剂 1.1　标准抗蛇毒血清 由中国药品生物制品检定所分发。标准抗蛇毒血清应保存于2～8℃。 1.2　蛇毒 由检定所分发。试验用的蛇毒须以检定所分发的标准抗蛇毒血清准确标定其试验量（蝮蛇、眼镜蛇及银环蛇1个L+，五步蛇2个L+）。使用干毒时，须以精确的分析天平称取，每次称取量不得少于5mg，溶解后应在3天内（保存于2～8℃）用完。干毒应封存于装有干燥剂的真空器皿中。亦可将干毒制成液体甘油蛇毒，即干毒溶解液与中性甘油（经116℃10分钟灭菌）等量混合，每ml至少含50个试验量，保存于2～8℃暗处。 1.3　稀释液 硼酸盐缓冲盐水，灭菌后pH应为7.0～7.4。配方为： 氯化钠8.5g 硼酸　4.5g 硼砂0.5g 加蒸馏水至1000ml，过滤。 2　用具 吸管、容量瓶、注射器应经标化。吸管、试管、容量瓶应洁净干燥，其他用具应灭菌。 3　试验动物 体重18～20g健康小白鼠。 4　试验方法 4.1　稀释标准抗蛇毒血清 用稀释液稀释标准抗蛇毒血清使每ml含抗银环蛇、眼镜蛇或抗蝮蛇毒血清5U、或抗五步蛇毒血清10U，即与5个相应蛇毒试验量混合后每0.4ml注射量中含1U或2U。 4.2　稀释蛇毒 用稀释液稀释蛇毒，使其5个试验量不超过0.8ml，在与抗蛇毒血清混合时补加稀释液至2ml，即每0.4ml注射量中含1个试验量。 4.3　稀释待检抗蛇毒血清 用稀释液将待检抭蛇毒清稀释成数个稀释度，使每ml抗蝮蛇、眼镜蛇或银环蛇毒血清约含5U或其上下：抗五步蛇毒血清约含10U或其上下。各稀释度间隔5%～10%。 4.4　混合 4