共反应试剂增强电致化学发光的生物传感器[精选].docVIP

共反应试剂增强电致化学发光信号生物传感器 王海军，肖丽娟，何颖，蒋欣亚，袁亚利，卓颖，柴雅琴，袁若* （西南大学化学化工学院，重庆 400715） 摘要：在电致化学发光（ECL）生物传感器的构建中，利用共反应试剂促进发光基团的发光效率是一种常见、方便且非常有效的方法. 然而，如何更好地利用共反应试剂使其更加有效地与发光基团作用是提高该类生物传感器灵敏度的关键因素. 本文综述了几种利用共反应试剂放大ECL信号的方法，即：将共反应试剂置于检测底液中；将共反应试剂置于电极表面；利用酶反应原位产生共反应试剂. 并在此基础之上提出了ECL信号放大策略的展望. 关键词：电致化学发光；共反应试剂；信号放大；生物传感器 中图分类号：O646（具体可参阅作者须知中的附件） 文献标识码：A  1 引言 电致化学发光(Electrochemiluminescence, ECL)是近年发展起来结合了电化学手段与化学发光方法的一种新型分析方法[1-3]. 通过对含有发光基团的体系施加电压，使得氧化还原产物之间或氧化还原产物与体系其它共存物质（如：共反应试剂）之间会发生化学反应并生成不稳定的激发态，该激发态发生电子跃迁而产生发光现象. 与传统的化学发光方法相比，ECL分析技术具有选择性好、可控性强、稳定性及灵敏度高等优点. 基于此，近些年来ECL分析技术被广泛地应用于分析检测领域. 特别是将该技术与生物识别和传感技术相结合构建了一系列生物传感器，实现了对细胞、蛋白质、核酸的灵敏检测[4-6]. 在这些生物传感器的构建中，如何实现信号放大并提高检测的灵敏度是众多科研工作者关注的热点[7,8]. 实践证明，向ECL发光体系中引入共反应试剂可以大大地提高发光基团的发光效率和ECL生物传感器的灵敏度. 以联吡啶钌（Ru(bpy)32+）及其衍生物的ECL体系为例，其常见的共反应试剂有三丙基胺（TPA）[9]、2-(二丁基氨基)乙醇（DBAE）[10,11]、2,5-二甲基噻吩（DMT）[12]等. 将上述共反应试剂加入Ru(bpy)32+体系的检测底液之中可以使传感器的检测灵敏度得到极大提高. 然而，类似的ECL共反应试剂大多是水溶性小分子，生物毒性大，将其加入检测底液中会增加操作步骤和测定误差. 另外，由于分子在溶液中扩散存在弛豫现象，使得溶液中共反应试剂与发光基团相互作用时呈现出电子转移速度慢、效率低等缺陷，限制了检测灵敏度的进一步提高. 所以，如何更加科学、有效地利用共反应试剂提高发光基团的发光效率成为了该类ECL生物传感器构建中的关键问题. 本文综述了几种基于共反应试剂放大ECL信号的方法，为ECL生物传感器的构建以及其他ECL相关的分析检测提出了新的思路. 2 共反应试剂置于溶液中的电致化学发光生物传感器 共反应试剂在氧化或还原时可以产生具有强还原性或强氧化性的中间体，该中间体和ECL体系的发光基团作用，从而增强ECL发光效率. 因此，在研究之初，为了提高ECL检测的灵敏度，通常直接在发光体系中加入共反应试剂，如草酸离子（C2O42-）[13]，三丙基胺（TPA）[14]，H2O2[15]，S2O82-[16]等. Yang等[17]将共反应试剂TPA直接加入检测底液中构建了一种夹心型免疫传感器. 首先将发光试剂Ru(bpy)32+固载于具有较大比表面积的多孔二氧化硅纳米颗粒(Ru-SiO2)，并用其标记IgG抗体. 通过抗原与抗体的特异性识别作用，大量的Ru(bpy)32+就被固载到了电极表面. 当向检测底液中加入共反应试剂TPA，电极表面的Ru(bpy)32+与底液中的TPA相互作用，从而有效地放大了该体系的ECL信号，提高了检测灵敏度. 该方法制备的传感器具有较宽的线性范围和重现性，能快速、特异性地检测IgG. 该传感器的制备过程如图1所示： 图1 基于TPA催化Ru(bpy)32+的ECL信号的免疫传感器组装原理示意图[17] Fig. 1 Schematic illustration of fabrication of the immunosensor Chen等[18]构建了以S2O82-为共反应试剂促进CdTe量子点的ECL发光的适体传感器用于检测凝血酶(thrombin, TB). 首先在聚苯乙烯(PS)上通过生物素与亲和素的相互作用层层自组装上大量的发光试剂CdTe量子点. 当共反应试剂S2O82-存在于底液中时，ECL信号得到了极大的增强. 实验结果表明，该传感器在0.5~800 pM范围内实现了对TB的灵敏检测. 另外，Chen等[19]基于DNA双链镶嵌邻菲啰呤钌，并经杂交链式反应（HCR）提高其固载量。当向溶液中加入共反应试剂TPA时，传感器的ECL信号显著增强. 基于此，该传感器实现了对