定蛋白质工程绪论.ppt

* 活动 1. 描述基因工程的操作步骤。 　　 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 活动 活动 2. 讨论基因工程产生的蛋白质的特点。 　　基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。 　　天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的，它们的结构和功能符合特定物种生存的需要，却不一定完全符合人类生产和生活的需要。 ——蛋白质工程的崛起 　　以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类对生产和生活的需求。（第二代基因工程） 前提： 原理： 目的： 了解蛋白质的结构和功能 改造基因(基因修饰或基因合成) 定向改造或制造蛋白质 一、蛋白质工程的概念 蛋白质工程是指通过物理化学与生物化学等技术了解蛋白质的结构和功能，并借助计算机辅助设计、基因定点诱变和重组DNA技术改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的蛋白质的技术。 关键技术： 基因工程 天然蛋白质的合成途径： 基因　　　表达（转录和翻译）　　　　形成氨基酸序列的多肽 链　　　　形成具有高级结构的蛋白质　　　　行使生物功能 预期的蛋白质功能出发　　　设计预期的蛋白质结构　　　推测 应有的氨基酸序列　　　找到相应的脱氧核苷酸序列 蛋白质工程的途径： 氨基酸序列多肽链 蛋白质三维结构 预期功能 基因 DNA DNA合成 分子设计 折叠 翻译 二、蛋白质工程的过程 转录 mRNA 生物功能 表现 （1）从生物体中分离纯化目的蛋白； （2）测定其氨基酸序列； （3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能 地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构; （4）设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化， 包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响； （5）设计编码该蛋白的基因改造方案，如点突变； （6）分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。 三、蛋白质工程的主要步骤 蛋白质工程的实质 对编码蛋白质的基因进行改造 对蛋白质进行改造 大改 中改 小改 设计、制造出自然界不存在的 全新蛋白质 替代某一个肽段或一个 特定的结构域 改造某个活性单位的一个或几 个氨基酸残基（定点诱变技术） 核心技术 基因定点诱变技术的示意图 基因定点诱变技术的理解 适应范围 结果 ＰＣＲ法 操作方法 ＡＴＰ 能量 引物 酶 原料 条件 　　　　　　内容 　项目 后代中半数为诱变的ＤＮＡ分子 脱氧核苷酸 ＤＮＡ聚合酶和ＤＮＡ连接酶 含突变顺序的ＤＮＡ分子片段 空间结构完全清楚的蛋白质 异亮氨酸 苏氨酸 蛋白质工程的应用 天门冬酰胺 天门冬酰胺 酵母菌 丙糖磷酸异构酶 热稳定性提高50％ 工业生产上 鼠抗体 人抗体 恒定区 恒定区 可变区 可变区 嵌合抗体 对人体的不良反应减少 制药领域上 蛋白质工程的进展与前景 蛋白质工程目前的现状：成功的例子不多，主要是因为蛋白质发挥其功能需要依赖于正确的空间结构，而科学家目前对大多数蛋白质的空间结构了解很少。 蛋白质改造工程举例 胰岛素改造 　 天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已通过临床实验。 　 　　1.你知道人类蛋白质组计划吗？它与蛋白质工程有什么关系？我国科学家承担了什么任务？ 思考 　　人类蛋白质组计划是继人类基因组计划之后，生命科学乃至自然领域一项重大的科学命题。 2001年，国际人类蛋白质组组织宣告成立。2003年，该组织正式提出启动了两项重大国际合作行动：一项是由中国科学家牵头执行的“人类肝脏蛋白质组计划”；另一项是以美国科学家牵头的“人类血浆蛋白质组计划”，由此拉开了人类蛋白质组计划的帷幕。 　　2. 对天然蛋白质进行改造，你认为应该直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？ 答：毫无疑问应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造，主要原因如下 　　（1）任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造。即使改造成功，被改造过的蛋白质分子还是无法遗传的。 　　（2）对基因进行改造比对蛋白质直接进行改造要容易操作，难度要小得多。 　　1.? 蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（　　　） 　　A. 氨基酸结构 　　B. 蛋白质空间