固定化酶的相关知识[精选].docVIP

固定化酶的相关知识 固定化酶的定义： 固定化酶技术是将酶用人工方法固定在特定载体上, 进行催化生产,因而固定化酶一般可以被认为是不溶性酶。 固定化酶的特点： 优点:1.易于将固定化酶与底物产物分高,便于后续的分离和纯化; 可以在较长时间内连续生产; 酶的稳定性和最适温度提高; 酶反应条件容易控制; 可以增加产物的收率,提高产物质量; 酶的使用效率高,使用成本低; 7.适于产业化连续化自动化生产 缺点:1.在固定化过程中,酶活力会损失; 生产成本提高,工厂初期投资大; 只能用于水溶性底物,适合于小分子; 4.不适宜于多酶反应,还需要需要辅助因子的协助才可以有效反应 固定化酶的方法：酶的固定化方法主要有四类：吸附法、包埋法、共价键法、交联法。 吸附法：吸附法是最简单的固定化方法，包括物理吸附和离子交换吸附。物理吸附法常用的吸附剂有活性炭、硅藻土、多空玻璃、多孔陶器、硅胶、氧化铝、羟基磷灰石等；离子吸附法是酶与载体通过范德华力、离子键和氢键等作用力固定。 包埋法：包埋法即酶在载体(如聚丙烯酰胺凝胶、矽酸盐凝胶、藻酸盐、角叉菜聚糖等)中发生聚合、沉淀或凝胶化而被固定的方法。包埋法常用的载体主要有：明胶、聚酰胺、琼脂、 琼脂糖、聚丙烯酰胺、光交联树脂、海藻酸钠、火棉胶等。 共价键法：共价键法是利用化学方法将载体活化，再与酶分子上的某些基团反应，形成共价的化学键，从而使酶分子结合到载体上。该方法使用广泛，固定化酶与载体连接牢固，不易脱落，有良好的稳定性及重复使用性，成为目前研究最为活跃的一类酶固定化方法。 共价键结合法常用的载体有：纤维素、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、甲壳素、氨基酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物等。 交联法：使酶与带两个以上的多官能团试剂进行交联反应，生成不溶于水的二维交联聚集体， 交联形成的固定化酶称为交联酶。与共价结合法一样，都是靠化学结合的方法使酶固定化，二者的区别在于交联法使用了交联剂。常用的交联剂有戊二醛、蹂酸。交联法—般作为其它固定化方法的辅助手段。 新型固定化方法：开发新型酶固定化方法的原则是：实现在较为温和的条件下进行酶的固定化，尽量减少或避免酶活力的损失。通过辐射、光、等离子体、电子等新方法均可制备高活性固定化酶。 固定化酶在制药工业上的应用 固定化酶或固定化细胞在医药工业上已经得到应用,尤其在半合成抗菌素工业和氨 基酸制备工业上已达到工业生产规模。 氨基酸光学异构体的拆分 本田边制药厂采用固定化氨基酞化酶选择性地水解N-乙酰基DL型氨基酸中N-乙 酰基L型氨基酸,生成L氨基酸和N-乙酰基D型氨基酸,然后使用结晶方法分离出L型氨基酸，N-乙酰基D型氨基酸可以进行外消旋化变成D L型混合物,再进行拆分。此法已于1969年投入工业生产。这种方法优点是收率高,工艺简单,并可自动化、连续化,制备成 本可下降10%。1974年日本利用这个方法进行L-蛋氨酸,L-苯丙氨酸,L-撷氨酸,L-色氨酸 和L-丙氨酸的生产。此法也可用于乙胺丁醇和 L-多巴的制造。 2.氨基酸和有机酸的合成 1973年日本田边药厂采用聚丙烯酞胺凝胶包埋大肠杆菌细胞（内含有天门冬酰胺酶） ,做成固定化细胞,用于L-天门冬氨酸的生产(以延胡索酸为原料),产率可达95%,成本下 降40%,固定化细胞可使用4个月。另外,固定化酶(或细胞)技术尚可用于制备色氨酸、酪氮酸、瓜氨酸、赖氨酸、谷氨酸、乌氨酸、苹果酸等，其中赖氨酸、瓜氨酸、乌氨酸、 苹果酸已投入工业生产。最近在国际第六届生物物理会议上曾报道，用角义菜胶包埋菌 体,用于工业上制备L-天门冬酰胺酸和苹果酸。 3.在半合成抗菌素工业中的应用 (1) 6-氨基青霉烷酸的制备：6-氨基青霉烷酸（6-APA）是半合成抗菌素中间体。采用固 定化酶技术,可将青霉素G直接水解生成6-A P A。固定化酶法制备6-A P A的工艺简单, 生产中无三废。近年来国外对此研究较多,1973年已应用于工业化生产。固定化酶技术还 可用于制备氨苄青霉素和羧苄青霉素。 （2 )头孢菌素的制备：7-氨基脱乙酰氨基头孢烷酸( 7-ADCA)是头孢菌素的母核,当母核 中引入不同侧链,可制得各种新头抱菌素。以青霉素G为原料,通过一系列化学反应,可得 到苯乙酞化7-ADCA,如采用化学法,很难由苯乙酸化7-ADCA得到7-ADCA。但采用固定 化酶技术则很容易去除侧链生成7-ADCA。目前该法已在进行7-ADCA中试规模生产。 以7-ADCA为原料,在固定化酶存在下还可制成先锋霉素4号. 4.甾体类药物的制备 许多甾体化合物,如果仅用化学方法很难制得,但使用微生物的酶可以很容易进行甾体化合物的转化。例如用化学合成法,由Reichstein化合物S制备强的松龙,需要7步合成 反应,而且得率低,有副反应产生。如果采用固定