狂犬病疫苗精选.ppt

人用狂犬病疫苗（Vero 细胞） RabiesmVaccine (Vero Cell) for Human Use 冻干人用狂犬病疫苗（Vero 细胞） Rabies Vaccine (Vero Cell) for Human Use ,Freeze-dried 人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞） Rabies Vaccine (Hamster Kidney Cell) for Human Use 一、基本要求 生产和检定用设备、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。 二、制造 2.1 生产用细胞：Vero 细胞 2.1.1 细胞的管理及检定 应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。各细胞种子批代次应不超过批准的限定代次。 取自同批工作细胞库的1支或多支细胞管，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。 2.1.2 细胞制备 取工作细胞库中的1支或几支细胞管，细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为一批。将复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化，分散成均匀的细胞，加入适宜的培养液混合均匀，置37℃培养成均匀单层细胞。 2.2 毒种 2.2.1 名称及由来 生产用毒种为狂犬病病毒固定毒CTN-1V株、aGV株或其他经Vero细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。 2.2.2 种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。各种子批代次应不超过批准的限定代次。 2.2.3 种子批毒种的检定 （1）鉴别试验：用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性，中和指数应不低于500. （2）病毒滴定：每个稀释度脑内接种体重为11-13g小鼠至少6只，病毒滴度应不低于7.5lgLD50/ml. （3）无菌检查：依法检查，应符合规定。 （4）支原体检查：依法检查，应符合规定。 （5）病毒外源因子检查：依法检查，应符合规定。 （6）免疫原性检查：用主种子批毒种制备原疫苗，腹腔免疫体重为12-14g小鼠，每只0.5ml，7天后重复接种1次。于第1次免疫后的第14天，用10倍系列稀释的CVS病毒脑内攻击，每只0.03ml，每个稀释度10只小鼠。同时，取同样体重的未免疫小鼠，用10倍系列稀释的CVS病毒脑内攻击作对照，每个稀释度10只小鼠，每只0.03ml。保护指数应不低于100. 2.2.4 毒种保存 毒种应置-60℃以下保存不得超过2年。 2.3 原液 2.3.1细胞制备：同2.1.2项 2.3.2培养液 培养液为含适量灭能小牛血清的MEM、199或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求。 2.3.3对照细胞病毒外源因子检查： 依法检查，应符合规定。 2.3.4病毒接种和培养 按0.01-0.1MOI或终浓度为4.5-5.5lgLD50/ml接种狂犬病病毒毒种，置适宜温度下培养一定时间后，用PBS冲洗去除小牛血清，加入适量维持液，置33-35℃继续培养。 2.3.5病毒收获 经培养适当时间，收获病毒液，各次收获的病毒液为单次病毒收获液，根据病毒收获液，根据细胞生长情况，可多次收获病毒液。 2.3.6单次病毒收获液检定：按3.1项进行。 2.3.7病毒灭活 病毒收获液按1:4000比例加入β-丙内酯，置适宜温度下一定时间内灭活病毒。 2.3.8 合并、浓缩、纯化 （1）合并及超滤浓缩 同批细胞生产的多次病毒收获液可在严格无菌操作的条件下合并为一批，经超滤或其他适宜方法适当浓缩。 （2）纯化 经浓缩并检定合格的病毒液以柱色谱或其他适宜的方法纯化，纯化后可加入适量人血白蛋白作为稳定剂及一定量硫柳汞作为防腐剂，即为原液。 2.3.9原液检定：按3.2项进行。 2.4半成品 2.4.1配制 根据蛋白质含量和抗原含量进行配制，总蛋白含量应不高于120μg/剂。可加入终浓度不高于0.70μg/ml的氢氧化铝佐剂吸附，即为半成品。 2.4.2半成品检定：按3.3项进行。 2.5成品 2.5.1分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2.5.2分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.5.3规格 每瓶1.0ml。每1次人用剂量为1.0ml，狂犬病疫苗效价应不低于2.5IU。 2.5.4包装 应符合“生物制品包装规程”规定。 三、检定 3.1单次病毒收获液检定 3.1.1病毒滴定：按2.2.3（2）项进行，病毒滴度应不低于6.0lgLD50/ml。 人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）病毒滴度应不低于5.5lgLD50/ml。 3.1.2无菌检查 依法检查，应符合规定。 3.1.3支原体检