层析分离方法[精选].docVIP

层析分离方法 概 述 ■ 层析法――是一种使不同分子相互分离的过程，当一混合样品被导入一固定相的支持体中，而另一流体(移动相)通过时，由于样品各组分与固定相和移动相相互作用的大小不同，使各组分通过固定相支持体的速率不同而得分离。 层析法的特点：能分离一系列结构较为相似的成分，以达到一般分离方法难以达到的目的。 ■ 层析常见种类及用途: a.柱层析――分离量较大，主要用于分离制备； b.薄层层析――主要用于分析鉴定,也可用于半微量制备。 c.纸层析――主要用于分析鉴定，也可用于半微量制备。 ■ 层析法按分离原理大体上又可以分为 (1) 吸附层析(利用吸附能力的差别进行分离)，常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等； (2) 分配层析(利用在二种不互溶的溶剂中分配比不同进行分离)，常用的支持剂为硅胶、硅藻土、纤维粉等，反相硅胶(键合硅胶)、液滴逆流层析则是分配层析与逆流分溶的发展； (3) 离子交换层析(利用离子解离强度不同进行分离)，常用的离子交换树脂有强酸性(磺酸型)、强碱性(季胺型)、弱酸性(羧酸型)、弱碱性(三级胺型)； (4) 电泳(利用电流通过时，离子趋电性不同进行分离)，常用的有纸电泳、琼脂电泳、凝胶电泳。 (5) 其他有气体层析、凝胶层析、亲和层析等， ■ 层析方法的选择： 非极性的成分常选择氧化铝或硅胶吸附层析； 极性较大则采用分配层析或弱吸附剂吸附层析； 酸性、两性成分可用离子交换层析，有时也可用吸附层析及分配层析。 ■ 各类化合物适宜的层析方法： a. 一般生物碱的分离可用硅胶或氧化铝层析，对极性较高的生物碱也可用分配层析，而对季胺型水溶性生物碱也可用分配层析或离子交换层析。 b. 甙类的层析分离往往决定于甙元的性质，如皂甙、强心甙，一般可用分配层析或硅胶吸附层析。 c. 芳香油、甾体、萜类(结合成甙除外)包括萜类内酯，往往首选氧化铝及硅胶层析，若在氧化铝柱上有次级反应，则宜用硅胶吸附层析。 d. 黄酮体、单宁等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附层析。 e. 有机酸、氨基酸一般可选用离子交换层析，有时也用分配层析，有些氨基酸也可用活性炭吸附层析。 f. 多肽、多糖等大分子化合物，常用凝胶层析、亲和层析、反相硅胶（键合硅胶）。 第一部分 柱层析 第一章 硅胶层析 层析用硅胶 层析用硅胶一般以SiO2·xH2O表示，系多孔性的硅氧环Siloxane(a)交链结构，由于其骨架 表面具有很多硅醇Silanol(b)基团，能吸着多量水分，此种水分几乎成游离状态存在，因此当加热至100℃左右能可逆地被除去。硅胶的活性水分含量有关(见表7-1)， 表7-1 氧化铝和硅胶含水量与活性的比较 硅胶加入水量（%） 活性 氧化铝加入水量（%） 0 I 0 5 II 3 15 III 6 25 IV 10 38 IV 15 含水量高则吸附力减弱，当游离水含量高达17%以上，吸附能力降低，而可作为分配层析载体。 硅胶于500℃加热能不可逆地失去结合水(一般170℃以上即有少量结合水失去)，从硅醇结构变成硅氧环结构，若加热至1,100℃则结合水尽失。由于硅胶的吸附能力主要与硅羟基数量有关，因此加热温度过高吸附能力反而降低。 有时硅胶层析具有吸附层析与分配层析的双重性质，甚至还有极弱的离子交换作用。 层析硅胶应是中性无色颗粒，但是由于制作过程常可带有酸性，如果酸性不强于pH5，一般已可使用。 ■ 商品层析硅胶合格的判定 PH值－一般先检查其是否中性。取硅胶一份混悬于100份水中放置，应得澄清的中性溶液。如滤液为酸性，应水洗至中性，再行活化处理。 铁离子的检查－一般将硅胶混悬于盐酸中，搅拌，如含铁离子则与盐酸结合成复合物而显黄色。有铁离子存在即预示有其他金属盐存在的可能性，因此最好以盐酸洗涤处理。在特殊情况下，硅胶须经乙醚、氯仿等有机溶剂预洗，至洗出液蒸干无残渣为止。 由于硅胶容易吸水，因此用前最好经120℃烘24小时活化，可不作活性测定。 ■ 硅胶的改良： 向层析硅胶中加入一种复合试剂，以改良吸附性能，提高分离效果，称改良吸附剂。例如以硝酸银处理的硅胶对不饱和烃类有极好的分离作用。以1~10%复合试剂的水或丙酮溶液，与硅胶混匀，待稍干后于110℃干燥即可。 表7-2 常用改良吸附剂 复合试剂 选择性分离物 0.1~0.5 N 酸或碱 pH敏感物质（生物碱、酸性、酚性、两性物质） AgNO3 具有双键或三键物质 硼酸、硼酸钠、碱式醋酸铅 多羟基化合物 亚硫酸钠 醛类 氯化铁 羟基喹啉类 硫酸铜 胺类 铁氰化锌 磺胺类 二、硅胶吸附层析的应用 ■ 硅胶层析的优、缺点： 优点： (1) 有些化合物用氧化铝层析，吸附剂副反应