刘1微生物的实验室培养(改)精选.pptVIP

三、结果分析与评价 1、培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 2、接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 3、是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。 四、课题延伸： 1．菌种的临时保存： 将菌种接种到试管的固体斜面培养基，放入4℃冰箱中保存。以后每3~6个月，要将 菌种转移到新的培养基。 四、课题延伸： 2．菌种的长期保存----甘油管藏 3ml甘油瓶中装入1ml甘油后灭菌，再加入1ml菌液，混匀后放入-20℃冷冻箱保存。 1、下列无菌操作中，错误的是( ) A．无菌操作的目的是防止杂菌污染 B．用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒 C．实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭 D 2、高压蒸气灭菌的原理是（ ） A．高压使细菌DNA变性 B．高压使细菌蛋白质凝固变性 C．高温烫死细菌 D．高温使细菌DNA变性 B 3.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是(　　)。 ①化学消毒　②灼烧灭菌　③干热灭菌　④紫外线灭菌　⑤高压蒸汽灭菌　⑥巴氏消毒法 A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 深度剖析　培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。 答案　A 二、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基 1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 培养基组分 提供的主要营养 牛肉膏5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 蛋白胨10g 碳源、氮源和维生素 NaCl 5g 无机盐 H2O定容至1000mL 氢元素、氧元素 1.计算（依微生物的生长需要） 大肠杆菌的实验室培养可分成 和 两个阶段进行。 制备培养基 纯化大肠杆菌 2.称量 牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速。 3.溶化 牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯。 加入琼脂，不断用玻璃棒搅拌，原因：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 4.灭菌 培养基放到锥形瓶中----高压蒸汽灭菌 培养皿----干热灭菌 5.倒平板 待培养基冷却到50OC左右时在酒精灯火焰附近倒平板。 用手触摸盛有培养基的锥形瓶刚刚不烫手时 熔化后灭菌前应该调节PH 倒平板操作 1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上。 右手----锥形瓶 左手----拨出棉塞 倒平板操作 2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。 灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染 倒平板操作 3. 将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 右手----倒培养基 左手----盖皿盖。 倒平板操作 4.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 讨论 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 （二）纯化大肠杆菌 1.纯化培养技术 纯化培养： 2.常见接种方法：★（高频考点） 平板划线法：主要用于纯化培养 稀释涂布平板法：主要用于分离菌种并计数 单个菌落 分离 单个细胞 聚集的微生物 培养 核心：防止杂菌污染，保证培养物的纯度 （二）纯化大肠杆菌 (1)平板划线法： 通过接种环在固体培养基表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可分离到由一个细胞繁殖而来的菌落。 接种环 平板划线 平板划线操作 平板划线操作 1.造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 2.存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落。 平板划线操作 平板划线操作 模拟平板划线： 1 2 3 4 5 （二）纯化大肠杆菌 (1)平板划线法： 接种过程中哪些步骤保证了无菌操作？ 对接种环、瓶(皿)口及时进行灼烧灭菌； 迅速进行操作； 将划线后的