【2017年整理】微生物限度检查操作规程.docVIP

第 PAGE 1页/共 NUMPAGES 6页 文件类型 操作规程（SOP） 文件编号 编 制 人 编制日期 年 月 日 编制部门 审 核 人 审核日期 年 月 日 审核部门 批 准 人 批准日期 年 月 日 颁发部门 编订依据 《中华人民共和国药典》2010年版、《中国药品检验标准操作规范》2010年版 替代文件 分发部门 生效日期 年 月 日 微生物限度检查操作规程 目的 建立一个微生物限度检查（包括细菌、霉菌、酵母菌）标准工作程序，规范QC微生物限度检查人员的微生物限度检查操作。 范围 适用于本公司的细菌、霉菌、酵母菌的限度检测。 责任者 QC微生物限度检查人员；质量管理部 内容 4.1检测准备 4.1.1 QC人员接到微生物限度检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定微生物限度检查所需的容器具、试液、培养基等的项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行微生物限度检查前的准备工作。 4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。 4.2 供试液的制备 4.2.1 4.2.2 供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。 4.2.2.1 可溶性液体供试品 文件名称 微生物限度检查操作规程 文件类型 操作规程（SOP） 文件编号 编订依据 《中国药典》2010年版、《操作规范》2010年版 替代文件 取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。 4.2.2.2 非水溶性液体供试品 油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。 4.2.2.3 水溶性固体 称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。 4.2.2.4 非水溶性供试品 取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20 4.2.2.5肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10 g，加PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1:10 4.2.2.7具抑菌成分供试品 当供试品抑菌活性时，应消除供试液的抑菌活性后，再依法检查，一般使用培养基稀释法，取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。取低稀释级供试液（原液或1:10的供试液）2份，每份各1ml，分别注入5个或5个以上平皿中（每皿0.2ml或0.2ml），每个平皿倾注培养基约15ml，混匀，凝固后，倒置培养，按每1ml分注的平皿点计菌落数之和计数，即为每1ml的菌落数，共得2组数据，再以2组数的平均数乘以稀释倍数的值报告菌数。 4.2.2.8 供试液的制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃ 文件名称 微生物限度检查操作规程 文件类型 操作规程（SOP） 文件编号 编订依据 《中国药典》2010年版、《GMP》2010年版 替代文件 4.2.3 供试液的梯度稀释（10倍递增稀释法） 4.2.3.1 取3或4支灭菌试管，分别加入9mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为稀释剂。加稀释剂后，应立即塞上试管塞。 4.2.3.2 另取1支1ml灭菌吸管，右手执管插入1:10（1级）均匀供试液内不低于液面2.5cm，反复吸吹约10次，吸液时，先吸至高于吸管上部刻度少许，然后提起吸管，贴与容器内壁，调整液量至1ml刻度，左手执装有9mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的试管并将塞打开，倾斜，将吸管移至第2级稀释管的内壁近液面处（勿接触液面），缓慢地放出全部供试液（吸管内应无黏附或残留液体），混匀，即为1:100供试液（2级）。以此类推，根据供试品污染程度，可稀释至1:103、1:104等适宜稀释级（3~4级）。每递增1稀释级，必须