紫外分光光度法详解.pptVIP

紫外-可见分光光度计 目录 一、基本原理 二、组成结构 三、分光光度计的类型 四、分光光度计的使用 五、注意事项 一、基本原理 采用一个可以产生多个波长的装置，通过系列分光装置，得到一束平行的波长范围很窄的单色光，透过一定厚度的试样溶液后，部分光被吸收，剩余的光照射到光电元件上，产生光电流，在仪器上可读取相应的吸光度或透光率，完成测定。 利用一定频率的紫外--可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。 溶液对光的作用示意图 光吸收遵循朗伯-比尔定律： I0 入射光辐射强度 I 透射光辐射强度 T 透射比 a 吸光系数 ε 摩尔吸光系数 二、组成构成 光源 单色器 吸收池 检测器 显示器 （1）光源 光源是提供入射光的装置。 要求发射连续的具有足够强度和稳定的紫外及可见光，并且辐射强度随波长的变化尽可能小，使用寿命长。 可见区常用的光源为钨灯，可用波长范围为 320-1000nm 在紫外区常用的光源为氢灯或氘灯，发射的连续光波长范围为 185-375nm 氘灯的辐射强度大，稳定性好，寿命也长。 （2）单色器 单色器是将光源辐射的复合光色散成单色光的光学装置。 一般由狭缝、色散元件及透镜系统组成。 最常用的色散元件是光栅和棱镜。 棱镜根据光的折射原理而将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过一个很窄的狭缝照射到吸收池上。 由玻璃或石英制成。玻璃棱镜用于可见光范围，石英棱镜则在紫外和可见光范围均可使用。 入射狭缝 准直透镜 棱镜 聚焦透镜 出射狭缝 白光 红 紫 λ1 λ2 光栅是根据光的衍射和干涉原理将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过狭缝照射到吸收池上。它的分辨率比棱镜大，可用的波长范围也较宽。 M1 M2 出射狭缝 光屏 透镜 平面透射光栅 光栅衍射示意图 （3）吸收池 用于盛放试液的装置 一般可见光区使用玻璃吸收池，紫外光区使用石英吸收池。 使用比色皿时应注意手持两侧毛边，保持清洁、透明，避免磨损透光面。盛放液体高度占四分之三。 （4）检测器 将光信号转变成电信号的装置。 要求灵敏度高，响应时间短，噪声水平低且有良好的稳定性。 常用的检测器有光电管、光电倍增管和光电二极管阵列检测器。 光电管能将所产生的光电流放大，可用来测量很弱的光。常用的光电管有蓝敏和红敏光电管两种。前者适用波长范围 210-625nm ；后者适用范围 625-1000nm 光电倍增管比普通光电管更灵敏，是利用二次电子发射来放大光电流。是目前高中档分光光度计中常用的一种检测器。 光电二极管阵列检测器是紫外-可见光度检测器的一个重要进展。这类检测器用光电二极管阵列作检测元件。通过单色器的光含有全部的吸收信息，在阵列上同时被检测，并用电子学方法及计算机技术对二极管阵列快速扫描采集数据，由于扫描速度非常快，可以得到三维光谱图。 （5）显示器 常用的装置有电表指示、图表指示及数字显示等。 三、分光光度计的类型 单光束分光光度计 双光束分光光度计 双波长分光光度计 0.575 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 单光束分光光度计 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度， 一般不能作全波段光谱扫描 双光束分光光度计 比值 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 光束分器 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵 敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂， 价格较高。 岛津UV-2550紫外可见分光光度计 双波长分光光度计 光源 单色器 单色器 切光源 检测器 吸收池 不需要参比溶液；可以消除背景吸收干扰；适合多组分混合物、浑浊试样的定量分析，可进行导数光谱分析。价格昂贵 四、分光光度计的使用 波长扫描 定量测定 波长扫描 开始 方法设定 样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池 进行用户基线校正 将样品放入样品池 开始测量 开始测量 打印数据 开始 方法设定 样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池 将样品放入样品池 开始测量 开始测量 打印数据 进行用户基线校正 定量测定 五、注意事项 1.开机预热15分钟左右。 2.测定时应注意： 参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收池，材料和规格一致。 使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触窗口。 已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变。 3.测量条件的选择： 选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。 控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只