荧光分光光度计的应用剖析.ppt

荧光分光光度计的应用 荧光分光光度法直接测定天然水中的酚 实验部分 1.仪器和主要试剂 日立 F一3000荧光分光光度计、标准酚溶液、0.200mol/L KH2PO4—0.275mol/L KHPO4缓冲溶液、饱和Na2C2O4溶液. 2.实验方法 3.结果与讨论 3.2 Na2C2O4的用量 天然水中含Ca2+，Mg2+较多，特别是海水，加入缓冲溶液会出现白色浑浊，使回收率偏低，加入1-2滴Na2C2O4可消除浑浊.（见表1） 3.4 荧光强度的稳定性 取酚标准溶液及空白溶液，依实验方法进行荧光强度稳定性试验。测 定了2.5小 时内荧光 强度变化情况，发现荧光强度在 1小时内基本不变。 3.5 样品分析 用流动注射在线富集分离荧光分光光度计测定垃圾渗 出液中的苯胺 实验部分 1.1 仪器和主要试剂 （1）流动注射仪, 自装配, 附具有富集作用的自填装微型柱; 荧光分光光度计 R F- 540( 日本岛津公司) , 附有自行研制的流通管;721 可见分光光度计( 上海第三分析仪器厂) 。 （2）苯胺标准贮备液( 10 g/ L) : 称取 2. 500 g 新蒸馏的无色分析纯苯胺, 用 25 mL 的 1 mo L/ L 盐酸溶解后, 移至 250 mL 容量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻 度, 置于冰箱中保存。 （3）苯胺工作溶液( 10 mg/ L) : 用移液管移取 1. 0 mL 的 10 g/ L 苯胺标准贮备液于 1 000 mL 容量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻度, 使用时配制。盐酸溶液( 0. 5 mo l / L) ; N H 3
H20- N H4Cl 缓冲溶 液( pH= 10) 。 1.2 实验方法 流动注射仪附填装有阳离子型大孔吸附树脂的微型柱, 流动注射分析过程由时序电路控制, 分为再生、 进样、冲洗、洗脱 4 步, 图 1 是流动注射分析的流程图, 旋转阀有 2 个工作状态, 图中所示为 A 状态, 箭 头所示为 B 状态。 各步的阀位置为: 再生 V 1 ( A) 、V 2( A ) , 进样 V 1 ( B) 、 V 2 ( A) , 冲洗 V 1 ( A) 、 V 2 ( A) , 洗脱 V 1 ( B) 、V 2 ( B) 。首先用盐酸溶液再生树脂; 然后进样, 在 p H 3 的条件下, 苯胺主要以 C6 H5 N H3+正离子形态存在, 被树脂吸附; 然后快速冲洗掉树脂颗粒间的残留样品; 最后进 行洗脱, 在 p H = 10 的条件下, 苯胺主要以 C 6H5N H2 分子形态存在, 吸附的C6 H5 N H3+ 转变为C 6H 5 N H 2 后被洗脱至荧光分光光度计内的流通管中, 用时间扫描动态检测洗脱液 荧光强度。 1.3结果与讨论 3.1 工作曲线 用移液管分别取 0. 0、 0. 5、0. 6、0 . 7、0. 8、0. 9、1. 0、2. 0、3 . 0、4. 0、5. 0 、6. 0 m L 10. 0 mg/ L 的苯胺标准溶液于一组 100 mL 容量瓶中, 定容后配制成含苯胺分别为 0. 00、0. 05 、0. 06、 0. 07、0. 08、 0. 09、0 . 10、0. 20、0. 30、 0. 40、0. 50 、0. 60 mg/ L 的标准溶液, 按上述实验条件动态检测荧光强度, 绘制荧光强度和质量浓度的工作曲线为: F = 48. 9C+ 15. 2, r = 0. 999 9。 线性范围为 0. 07~0. 50 mg/ L 。 3.2干扰 在上述实验条件下研究了 3 m g / L 的苯酚、 联苯胺、2, 4- 二硝基苯胺、 对氨基 苯甲酸、二苯胺等对 0. 30 mg/ L 的苯胺的干扰情况。 结果表明: ( 1) 酚类物质、 联苯胺、 2, 4 - 二硝基苯胺、 二苯胺等胺类物质不干扰苯胺的测定, 这主要是因 为它们不能以正离子的形态被树脂吸附; ( 2) 对氨基苯甲酸等也不干扰苯胺的测 定。 3.3水样的测定及显著性检验 将此法应用于垃圾渗出液的测定。 取垃圾渗出液蒸馏, 得到1 L 蒸馏液, 然后用本法直接进 样分析, 结果见表 1。 表 1 同时给出了对蒸馏液进行萃取后用 HPL C 测定的结果及 t 检验的 结果。可以看出, 在 95% 的置信水平下, 两种方法没有显著性差异, 结果令人满意。 2.4 回收率实验 取 1 L 垃圾渗出液蒸馏, 向蒸馏液中分别加入含苯胺 0. 100、0. 200 mg 的标准溶液, 然后用蒸馏水稀释至2 L 后直接进样分析, 结果见表1。可以看出, 本法的回收率在 96% ~ 104 % 之间。图 2