土壤中產淀粉酶芽胞杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定设计性实验方案.docx

土壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选鉴定实验课程名称：微生物学实验学院：生命科学学院班别：10生工1周伟竞学号1014200006摘要：本实验通过稀释平板和分区划线的方法在生化楼外走廊的楼道下的土壤样品中分离到能产淀粉酶的芽孢杆菌，鉴定得出的菌种是环状芽孢杆菌前言：淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称，广泛存在于动物、植物和微生物中。目前淀粉酶广泛应用多种领域，在发酵工业中淀粉酶可用于淀粉原料的液化及糖化工艺; 在食品工业中淀粉酶可用于面包焙烤，使其体积更大，颜色更好，颗粒更柔软; 在农业中淀粉酶可作为饲料添加剂，降解饲料中淀粉营养成分以利于动物吸收利用; 此外，淀粉酶在医疗卫生、废料处理、纺织印染等领域都有广泛应用。The Screening and Isolation of Bacillus Strains Producing AmylaseAbstract: this experiment by the dilution plate and the partition line method in biochemistry building corridor . the soil sample is separated into producing amylase Bacillus strain, identification of Bacillus circulans strain is derived1.实验目的1、了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术； 2、掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法； 3、掌握微生物的摇瓶培养方法4、培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力； 5、对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练；2.实验原理在环境中的微生物混居杂生，但我们想得到其中某一种微生物。纯培养的目的就是得到只含一种微生物的培养物；纯培养分离技术：微生物分离和纯化。根据该微生物对营养和生长条件的要求设计培养（或者加入抑制物）或者培养条件； 产淀粉酶的芽孢杆菌：样品稀释；加热土壤悬液杀非芽孢细菌、平板分离获单菌落；革兰氏染色、芽孢染色判断菌株是否为芽孢杆菌；淀粉水解实验；分离菌：进一步划线纯化，鉴定；3.实验材料和用具营养琼脂斜面培养基、淀粉牛肉膏蛋白胨培养基、蒸馏水、三角瓶(300mL、500mL)、试管、培养皿(9cm)、恒温摇床、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌箱、超净工作台、水浴箱、紫外照射箱、磁力搅拌器、玻璃珠、移液管、涂布器、酒精灯等。四、实验方法1、土样的采集取在生化楼外走廊的楼道下的土壤样品土样点，用无菌用具，用酒精擦拭过的铲子铲去表土，取其各自表土 5cm 左右的深处土壤，装进无菌防水纸袋，编号包装好。2、菌株的分离提纯2.1 土壤稀释液的制备①土样取10g，放入装有 45mL 无菌水的三角瓶，振荡 10min,即为稀释 10-1 的土壤悬浮液。土样装 1 个锥形瓶，同时将其分为2组，分别编号12。②将锥形瓶加塞、包扎、摇匀（无菌室里），利用恒温水浴装置 80℃左右水浴，水浴锅度恒定后维持 20min（制悬液时就应先开始加热），制成 10-1 g/ml 的土壤悬液③再分别另取装有 9mL 无菌水试管，用记号笔编上 10-2、10-3、10-4、10-5。取已稀释成 10-1 土壤液，振荡后静止 0.5min，用无菌吸管吸取 1mL 土壤悬液加入 10-2 的无菌水的试管中，并在试管内轻轻反复吹吸数次，使之充分混匀，即成 10-2 土壤稀释液。同法从 10-2 的试管中吸取 1mL 稀释液加入编号为 10-3 的无菌水试管中，混匀后即为 10-3 土壤稀释液，依次连续稀释为 10-4、10-5 土壤稀释液。在土壤稀释过程中，以同一支吸管由浓到稀，稀释到底。④选择稀释度 10-2、10-3、10-4，加热 80℃20min 处理稀释液以杀死无芽孢细菌，浓缩芽孢杆菌。 2.2 分离土壤中的细菌及纯化①制作平板每组取无菌培养皿 2 副，各在培养皿底部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。取已溶化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入无菌培养皿中，制成平板。②涂布平板用一支新的无菌枪头，由低浓度开始，从各浓度土壤稀释液中各吸取 100ul，对号较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用灼烧冷却后的无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做 3 个平板（重复）。③划线接种（分区划线法）平板凝固后，各组分别用接种环以无菌操作挑取平板上长出的单菌落分区划线，先在平板培养基的一边作第 1 次平行划线 3~4 条，再转动培养皿约 60°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第 1 次划线部分作第 2 次平行划线，再用同法通过第 2 次平行划线部分作第 3 次平行划线和通过第 3 次平行划线部分作第 4 次