第二章 组织培养基本技术[精选].pptVIP

三、玻璃化的原因 玻璃化的起因是细胞生长过程中的环境变化。试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。 产生玻璃化苗的因素主要有激素浓度、琼脂用量、温度、离子水平、光照时间、通风条件等。 1、激素浓度 激素浓度增加尤其是细胞分裂素浓度提高（或细胞分裂素与生长素比例高），易导致玻璃化苗的产生。 2、琼脂浓度 培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，水浸状严重，苗向上长。随着琼脂浓度的增加，玻璃化苗比例减少，但由于硬化的培养基影响了养分的吸收，试管苗生长减慢，分蘖亦减少。因此，琼脂的浓度一定要适当。 3、温度 适宜的温度可以使试管苗生长良好，当温度低时，容易形成玻璃化苗，温度越低玻璃化苗的比例越高。温度高时玻璃化苗减少，且发生的时间较晚。 4、光照时间 不同的植物对光照的要求不同，满足植物的光照时间，试管苗才能生长正常。大多数植物在12h～14h光照下都能生长良好，光照时数大于16h时，玻璃化苗的比例明显增加。 5、通风条件 试管苗生长期间，要求有足够的气体交换，气体交换的好坏取决于生长量、瓶内空间、培养时间和瓶盖种类。在一定容量的培养瓶内，愈伤组织和试管苗生长越快，越容易形成玻璃化苗。如果培养瓶容量小，气体交换不良，易发生玻璃化。 6、离子水平 植物生长需要一定的矿物质营养，但是，如果营养离子之间失去平衡，试管苗生长就会受到影响。植物种类不同，对矿物质的量、离子形态、离子间的比例要求不同。如果培养基中离子种类及其比例不适宜该种植物，玻璃化苗的比例就会增加。 四、预防玻璃化的措施 1．适当控制培养基中无机营养成分 大多数植物在MS培养基上生长良好，玻璃化苗的比例较低，主要是由于MS培养基的硝态氮、钙、锌、锰的含量较高的缘故。适当增加培养基中钙、锌、锰、钾、铁、铜、镁的含量，降低氮和氯元素比例，特别是降低铵态氮浓度，提高硝态氮浓度，可减少玻璃化苗的比例。 2．适当提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度 适当提高培养基中蔗糖的含量，可降低培养基中的渗透势，减少外植体从培养基中可获得的水分；而适当提高培养基中琼脂的含量，可降低培养基的衬质势，造成细胞吸水阻遏，也可降低玻璃化。如将琼脂浓度提高到1.1%时，洋蓟的玻璃化苗完全消失。 衬质势 因衬质成分表面吸附力(细胞胶体物质亲水性和毛细管对自由水束缚)而产生的水势。 由于某种原因而降低的水化学势而言。吸附在土壤粒子和细胞壁微纤维上的水，可分为（1）基于土壤粒子表面强有力的吸附力，主要是2—3层的水分子；（2）表现为来自弯月形液面的表面张力的毛细管水；（3）表面电荷与水的氢结合所吸附的水。在这些情况下，作用力可使水的势能降低。 渗透势 溶液中由溶质存在所产生的水势。因为溶质对水分子的吸附作用，使水的活性下降，所以和纯水相比，含有溶质的水做功的能力降低了，故渗透势为负值。 细胞吸水情况取决于细胞水势，典型的水势是由三个势组成的：Ψw=Ψπ+Ψp+Ψg Ψw为细胞水势，Ψπ为渗透势Ψp为压力势，Ψg为重力势。渗透势亦称溶质势渗透势是由于溶质颗粒的存在，降低了水的自由能，因而其水势低于纯水的水势,这种水势差即为渗透势。因为纯水水势被定为零，所以渗透势为负值。某溶液渗透势的绝对值与该溶液渗透压的绝对值相等。在标准压力下，溶液的渗透势等于溶液的水势，因为溶液的压力势为0MPa。溶液的的渗透势决定于溶液中溶质颗粒总数。 3．适当降低细胞分裂素和赤霉素的浓度 细胞分裂素和赤霉素可以促进芽的分化，但是为了防止玻璃化现象，应适当减少其用量，或增加生长素的比例。在继代培养时，要逐步减少细胞分裂素的含量。 4．增加自然光照，控制光照时间 在试验中发现，玻璃苗放在自然光下几天后茎、叶变红，玻璃化逐渐消失。这是因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟，加快木质化。光照时间不宜太长，大多数植物以10h ～14h为宜；光照强度在1500lx～1800lx之间，就此可以满足植物生长的要求。 5．控制好温度 培养温度要适合植物的正常生长发育。如果培养室的温度过低，应采取增温措施。热击处理，可防止玻璃化的发生。如用40℃热击处理瑞香愈伤组织培养物可完全消除其再生苗的玻璃化，同时还能提高愈伤组织芽的分化频率。 6．改善培养器皿的气体交换状况 如使用棉塞、滤纸片或通气好的封口膜封口。 7．在培养基中添加其它物质 在培养基中加入间苯三酚或根皮苷或其它添加物，可有效地减轻或防治试管苗玻璃化，如添加马铃薯法可降低油菜的玻璃化苗的产生频率，而用0.5mg/L多效唑或10mg/L的矮壮素可减少重瓣丝石竹试管苗玻璃化的发生；而添加1.5 g/L～2.5g/L的聚乙稀醇成为防治苹