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p178 第七章 遗传毒物与细胞死亡 细胞死亡是细胞对内外环境不利或有害因素的一个最悲剧性反应。遗传毒物也可通 速。已有可能对细胞凋亡的发生进行干预，成为控制病理状态甚至疾病发生发展的一种 可选择的手段。本章将首先对细胞死亡，特别对细胞凋亡的基本概念作一介绍，然后阐述 遗传毒物诱发细胞凋亡的主要信号通路，最后对确认细胞凋亡的技术进行简要的评述。 第一节 细胞凋亡和非凋亡性死亡 高等生物的细胞死亡有两种形式(apoptoti cell death)和非凋亡性细胞死亡 non-apopototic cell death。细胞的非凋亡性死亡，即细胞坏死(necrosis)是由于有害刺激或 细胞，细胞因肿胀而破裂，细胞内容物释放而诱发进一步的损伤和炎症反应。因此细胞非 凋亡性死亡又称为细胞的意外死亡( accidental cell death)。细胞凋亡(apoptosis)曾被称 ( programmed cell death，PCD)则是由于细胞内外因子诱发了细胞内一 apoptosis出自希腊语，指细胞的死亡犹如 亡小体具有完整的膜结构，内含部分胞质、细胞器和破碎的细胞核成分，形成的凋亡小体 由邻近的正常细胞或吞噬细胞清除，其内容物不会因外泄而引起炎症反应。在细胞凋亡 的最后阶段，核小体连接部的DNA会被核酸内切酶降解成不同倍数的180～200bp左右 (ladder pattern)，是凋亡细胞常出 7 -1。 表7-1 细胞凋亡和细胞坏死的比较 细胞凋亡 细胞坏死 定义 在形态学上表现为细胞皱缩，核碎 裂、胞浆生芽和形成凋亡小体 为病理性袭击的结果，质膜的完整性突然消 失、膜电化学梯度消失和细胞内容物释出 诱发刺激 生理性或病理性 病理性 形态表现 成泡 有（细胞器呈泡状） 有（无细胞器呈泡状） 质膜完整性 保持 破损 细胞大小 缩小——细胞皱缩和形成凋亡小体 增大——细胞肿胀并溶解 炎症反应 无 有 细胞内容释出 不 是 生化表现 大分子（蛋白质）合成 有些情况下必需 非必需 基因表达 有些情况下必需 非随机裂解为50、300kb，随后再裂 非必需 DNA裂解 解为180bp为倍数的碎片（大小由涉及的核小体数决定） 随机裂解 调控 高度受控 不受调控 半胱天冬酶级联反应 必需 非必需 p179 细胞凋亡可在各种异常情况下发生，细胞处于不利生长环境如培养细胞遭遇血清和 pH和渗透压改变等应激状态，以及细胞遭遇各种类 DNA损伤、线粒体损伤、病原体感染或恶性转化都可通过诱发细胞凋亡以 (metamorphosis)中 程中介。如在胚胎发育过程中，手形成时除去指间空隙中的细胞；受体基因未经重排的， 以及可识别自身组织的胸腺细胞也通过凋亡而除去；在成体动物，衰老细胞也必需除去代 之以新生细胞以维持其稳态[1～5]。 第二节细胞凋亡概论 一、细胞凋亡执行器与蛋白酶半胱天冬酶级联反应 凋亡过程的执行器(executor)为细胞的蛋白酶，不论何种因素诱发的细胞凋亡，虽其 其早期证据来自细胞毒T细胞和自然杀伤细胞胞浆颗粒组分中发现的穿孔素(perforin) 8与断裂素一2(granzyme B／fragmentin 2)有独特 8的纯制品就足以诱发细胞 (Caenorhabditis elegans)发育过程中发生的细胞死亡的研究。在线虫的l5个死亡相关基 ced一3，ced一4是指令死亡基因，而ced一9是抑制ced一3／ced一4的存活基因。 ced一3同源的基因是ICE，即 l的基ced一4的同源基因是编码凋亡蛋白酶活化因子(apoptosis Drotease activating factor一1，Apaf一1)的基因，而与ced一9同源的是一2基因家族。 ICE编码的白介素一l转化酶(interleukin—lp—converting enzyme，ICE)可在天冬氨酸 33kDa的IL一1前体裂解为17．5kDa的活性酶，因此该酶属半胱氨酸蛋白 (cystein protease)。目前已发现l4个对细胞凋亡及(或)炎症有重要作用的ICE 超家族成员，称为半胱天冬酶一l～14，其中包括3个在人类还未找到相应对等物的小鼠 ll、一l2和一l4。根据其序列同源性被分为三个亚家族；ICE一样、ICH一1 CPP32样蛋白酶。它们具有保守的底物结合和酶促序列，并都在天冬氨酸残基后将 (caspase)命名