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HPLC的突出特点： 1）高压; 2）高速; 3）高效;  4）高灵敏度(10-9); 5）高选择性; 盐的影响： 通常加入醋酸盐、硼酸盐、硫酸盐等。无机盐使流动相表面张力增大，对非离子性溶质，使k增加，对离子型溶质，k下降。对碱性有机物有改善峰形的作用。 pH值： 加入酸、碱或缓冲液，控制PH，抑制溶质的离子化，改善峰形。用于分析弱酸、碱。 梯度洗提(脱) 梯度洗脱即程序控制流动相的组成，使在整个分离过程中，溶剂强度按照特定的变化规律增加。 优点：分离复杂混合物，使所有组分都处在最佳的k值范围内。 缺点：检测器的使用受到限制，分析结果的重复性取决于流速的稳定性。柱子需进行再生处理。 与气相色谱中的程序升温相当 对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase色谱），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase色谱）。 ***化学键合相色谱法*** 为了解决固定液的流失问题，人们将各种不同的有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶(载体)表面的游离羟基上，而生成化学键合固定相，并进而发展成键合相色谱法。 特点：化学键合固定相对各种极性溶剂都有良好的化学稳定性和热稳定性。由它制备的色谱柱柱效高、使用寿命长、重现性好，几乎对各种类型的有机化合物都呈现良好的选择性，特别适用于具有宽范围k值的样品的分离，并可用于梯度洗脱操作。 根据键合固定相与流动相相对极性的强弱，该法分为正相键合相色谱法和反相键合相色谱法。在前者中，键合固定相的极性大于流动相的极性，适用于分离油溶性或水溶性的极性和强极性化合物。在后者中，键合固定相的极性小于流动相的极性，适于分离非极性、极性或离子型化合物。据统计在高效液相色谱法中，约70％——80％的分析任务皆由反相键合相色谱法来完成的。 为什么反相色谱应用如此广泛? 它能使中性化合物和极性化合物在一根色谱柱中得到分离。 适用于多种基体中的多类不同性质化合物的测定和分离。 保留时间可以用分子的疏水性进行描述和解释。 所用高纯度的水、甲醇和乙腈等溶剂价格便宜、实用。 选择性可通过用缓冲溶液进行调节（通过调节pH值来调节离子强度和胶团粒子大小等等），以实现最佳分离。 HPLC 色谱柱结构 手性的普遍性及在医药中的重要性 手性的发现和普遍存在 Pasteur（1848年外消旋酒石酸钠铵盐晶体） 实物与镜像不重合 蛋白质、核酸等 手性化合物的性质 (旋光、手性环境) 反应停事件（20世纪六十年代） 烷基键合固定相特性对保留值的影响： 反相：键合相烷链长，k大，选择性好。 现代高效液相色谱柱的要求 超纯 B 型球形硅胶 —— 峰形好、柱效高。 不能有使色谱性能降低的直径小于50 ?的微孔。 粒径尺寸从 3 μm 到 10 μm ——能满足从分析到制备色谱规模的需求。 色谱柱柱床装填好 —— 使用寿命长、柱效高。 封尾彻底 —— 峰形好、使用寿命长。 批与批之间得重现性好。 不同的相具有不同的选择性 —— 能更好的实现分离。 键合相化学稳定好 —— 适用的 pH 范围广, 使用寿命长。 5 - 20 10 - 25 2.0 – 5.0 制备柱 5 - 20 10 - 25 0.8 – 1.0 半制备柱 3 - 8 15, 25 0.1, 0.21 微孔柱 3 - 10 3 - 25 0.3 – 0.46 分析柱 粒径 (μm) 柱长(cm) 内径D (cm) 类 型 HPLC在医药方面的应用 1、新药研发：目标物的检测、纯度等2、药品的预处理：片剂，油膏，水剂等3、体液：血、尿、脊椎液、唾液等4、抗菌素 ：青霉素 、甾族(激素)等 5、其它…… HPLC在环保方面的应用 1、农药残留量分析 ：含氯农药 、有机磷  农药 、除虫菊等2、致癌物质 ：硝基呋喃及其代谢物、霉 素 、亚硝胺、苯并芘等3、水质分析：内分泌污染物等4、其它…… HPLC在生化方面的应用 1、蛋白质分析2、肽类的分析3、核酸4、氨基酸 5、其它…… * * * * * * 高效液相色谱简介 （HPLC） 是以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上，采用颗粒十分细的固定相，并采用高压泵输送流动相而建立的一种液相色谱法。 HPLC的应用范围：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制，分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测，用途广泛，占有机物的80%。 GC与LC的比较 HPLC系统 溶剂传输系统：心脏 高压泵 样品引入系统：自动购置 进样器 样品分离系统：关键 色谱柱