离心技术20120911(2011级临床本科)[精选].ppt

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离心技术20120911(2011级临床本科)[精选]

分析与检测技术 以常用分析与检测实验技术为主线,以细胞与分子生物学、生物化学、免疫学、遗传学等学科内容为基础,使医学生初步掌握常用分析与检测实验技术的基本知识和技能、常规仪器设备的使用和保养,了解现代分子生物学技术的基本知识,熟悉各种检测指标的临床意义。 主讲内容: 一、离心原理与技术 二、常用标记技术 三、其它实验技术 离心原理与技术 离心技术是指利用旋转运动产生的离心力,根据物质的沉降系数或浮力密度的差别进行物质的分析、分离、浓缩和提纯的一种技术。 应用:分离、纯化样品及对已纯化的样品进行结构和性质分析。 离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置。 它主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开;或将乳浊液中两种密度不同,又互不相溶的液体分开(例如从牛奶中分离出奶油);它也可用于排除湿固体中的液体,例如用洗衣机甩干湿衣服;特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物;利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点,有的沉降离心机还可对固体颗粒按密度或粒度进行分级。 内容: 第一节 离心技术的基本原理 第二节 离心设备 第三节 常用离心方法及应用 第一节 离心技术的基本原理 一、离心的一般原理 二、离心力和相对离心力 三、沉降速度 四、沉降系数 五、沉降时间 六、测定相对分子量 RCF= 1.119×10-5 n2 r RCF =1.119×10-5×(12000)2×3.8 =6123g RCF =1.119×10-5×(12000)2×8.1 =13052g 第二节 离心设备 一、离心机 二、离心机的基本构造 三、离心转头 四、离心管 五、离心机使用注意事项 离心机的基本构造 驱动电机、制冷系统、真空系统、显示系统、自动保护系统、控制系统、光学检测系统(分析型) 必要配件:转头和离心管 设40000rpm时 R1最小、 3.8cm R2平均、 5.9cm R3最大、 8.1cm RCF值分别 67,910g 105,400g 144,700g 四、离心管 材料:玻璃(低速)、塑料、不锈钢(高速、超速) 五、离心机使用注意事项 1、离心要平稳 2、平衡 3、低档启动 4、合适的转头和转速 5、干燥清洁 6、按需选用离心管 7、低温离心样品需预冷 8、异常情况,停机检查 9、校正 第三节 常用离心方法及应用 阅读离心机使用说明书,转头说明书 说明书应该放置在离心机旁边,使用前必须仔细阅读说明书 防止事故发生 离心机事故 离心机高速运转,使用不当或者维护不当,会出严重事故 主要是转头事故,转头爆炸 离心机的安全使用 说明书与相关资料 机器、转头、离心管正确使用方法 专人管理,维护保养,排出故障 离心基本概念 转速 离心力和相对离心力 容量 K因子 转速的描述 RPM 转/分 角速度—每秒转过的弧度数 1 ω 弧度即为弧长等于半径的圆弧所对的圆心角 “ 转速 ” 的含义 离心机的最高转速 转头的最高转速 转头的最高允许转速 转头的允许转速 离心机的最高转速 可以用于该离心机的转头中,转速最高的这个转速,是离心机最高转速 转头的最高允许转速 样品密度不超过1.2克/ml的情况下,和以下因素有关: 离心机型号 离心管形状、材料、厚度 (注意,同样的离心管在不同转头中使用,最高允许转速也可能不同) 离心管帽的材质 离心管是否装满 是否用适配器 必须根据实际使用情况,从转头手册和转头说明书中查询 转头的允许转速 样品密度超过了1.2克/ml的情况下: 转头的允许转速=转头的最高允许转速×(1.2/样品的平均密度)1/2 注意:不适用于密度梯度离心 离心力和相对离心力 “离心力是多少个g”的提法不对 离心力=粒子质量×离心加速度 (F离心力=m×r ω 2) 相对离心力RCF= F离心力/F重力= r ω 2/g RCF与RPM换算 ω = 2 π RPM/60 = 0.10472 RPM RCF= r ω 2/g=( 0.10472 RPM )2×r/g r以毫米为单位时, RCF=1.12r×(RPM/1000)2 RPM=1000×(RCF/1.12r)1/2 例:文献给出条件为80000g, RPM=1000×(80000/1.12r)1/2 转头的K系数 K值的应用 同一转头,改变离心转速时,计算离心时间: K值的应用 K值越小,转头的效率越高,选择合适的转头 在离心管允许不加满的情况下,可以通过减少各个管内样品,降低k值,缩短离心时间 离心机的维护保养 转头的某些部位是铝合金,保养不当会腐蚀,引起离心不平衡,发生事故 离

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