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中南大学生物科学与技术学院 分子生物学研究中心 教 案 授课科目: 医学分子生物学授课内容: 基因工程与体外表达 授课对象：临床医学七年制、八年制 授课时数：6 学时授课教师：授课地点：湘雅医学院新教学区 授课时间： 授课教材：医学分子生物学（21世纪高等院校教材），胡维新主编，北京：科学出版社，2007年2月，第一版； 医学分子生物学（卫生部8年制规划教材），冯作化主编，北京： 人民卫生出版社，2005，第一版 第八章 基因工程与体外表达 一、目的要求： 掌握：常用克隆载体；基因克隆的基本过程；外源基因在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达的原理和方法。 熟悉：限制性核酸内切酶和其他常用工具酶的概念和特点；定点诱变技术原理。 了解：昆虫表达系统；酵母表达系统。 二、讲授重点： 基因克隆的基本过程。 三、讲授难点： α－互补筛选；阳性转染细胞的筛选；定点诱变技术原理。 四、教学方法：多媒体教学 五、教 具：多媒体课件 六、讲授内容： 第一节 基因工程中的工具酶 ?一、限制性核酸内切酶（restriction enzyme） 限制性核酸内切酶是基因克隆中最重要的工具酶，主要从原核细胞中提取。它是一种核酸内切酶，能从双链DNA内部特异位点识别并且裂解磷酸二酯键。 1．限制性核酸内切酶的分类 Ⅰ型酶具有限制和DNA修饰作用。这种酶在非