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微生物实验 目录 实验七 噬菌体的培养及效价测定 1 实验八 培养基的配制和灭菌 3 实验九 土壤微生物的分离与生理生化实验(I) 5 实验十? 土壤微生物纯化与生理生化试验（II） 7 实验七 噬菌体的培养及效价测定 ?? 一、实验目的 ??? 1.了解噬菌体效价的含义及其测定的原理。 ??? 2.掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 ?? 二、实验器材 ?????? 1．菌种：大肠杆菌、大肠杆菌噬菌体。 ?????? 2．培养基：牛肉膏蛋白胨培养液、上层牛肉膏蛋白胨阗固体琼脂培养基(90.7%琼脂)、底层牛肉膏蛋白胨固体琼脂培养基(2%琼脂)。 ????? 3．器皿：无菌试管、无菌培养皿、无菌移液管(5ml、1ml)等，恒温水浴锅。 ?? 三、实验内容 ??? 用双层琼脂平板法进行噬菌体的培养与效价的测定。 四、方法步骤 　　1．吸取0.1ml10-2噬菌体稀释液于装有0.9ml液体培养基的试管中逐级稀释至10-6，注明稀释度。 　　2．分别吸取0.1ml不同稀释度的噬菌体悬液于无菌空试管，标记。 　　3．吸取摇匀的大肠杆菌培养液0.9ml于另一支空白试管，注明对照(CK)。 　　4.按由低到高浓度的顺序吸取0.9ml大肠杆菌培养液于盛有0.1ml不同稀释度的噬菌体试管，混匀。 　　5．将5管装有4ml上层半固体培养基熔化，冷却至48oC，置于水浴锅上保温。 　　6．将4管混合液和对照对号加入上层培养基试管内，立即混匀。 　　7．将混匀的上层培养基倒入底层平板上，摇匀，平放，凝固后置37oC培养。 五、结果与思考 1.噬菌体效价的含义是什么?测定噬菌体效价需严格控制哪些关键步骤? 2.记录各稀释度平板的pfu数。 3.计算所测得的噬菌体效价(个/ml) 效价=pfu数×稀释倍数 实验八 培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1．了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤 2．了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法。 二、实验器材 1．药品及试剂： 可溶性淀粉 KNO3 K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O 1mol/L NaOH 琼脂 2．仪器及其它 试管 三角瓶 烧杯 量筒 玻棒 天平 药匙 高压蒸汽灭菌锅 pH试纸(5.5-9.0) 棉花 牛皮纸 记号笔 麻绳 纱布 干燥箱 培养皿 涂布棒 吸管（1ml） 玻璃珠 三、实验内容 1．分组配制高氏一号培养基300ml。 配方：可溶性淀粉 　20g 　　NaCL 　0.5g 　　KNO3 　1g K2HPO4·3H2O　 0.5g 　　MgSO4*7H2O 　　0.5g　　 FeSO4*7H2O 　0.01g 琼脂 　　　　　15-25g 　水　　　　　　1000ml　　pH 7.4-7.6 2．每组制备玻璃珠无菌水(50ml)三角瓶2个。 3．每组制备无菌水试管(4.5ml/管)10支。 4．每组包9cm培养皿24付，6付一包。 5．每组包装1ml吸管5支，玻璃刮铲4个。 四、方法步骤 （一）培养基的制备与分装 1．称量：按培养基配方比例依次准确地称取药品。可溶性淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份，补足所需水分，混匀后加入琼脂。 2．熔化：在沸水浴锅中加热熔化。 3．调pH：用1N NaOH调pH至7.4-7.6。 4．过滤：趁热用多层纱布过滤（本实验勿需过滤） 5．分装：将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，装量不超过试管的1/4，注意管口不要沾上培养基。 6．加棉塞：试管应先捆成一捆，然后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。 （二）无菌水的制备 7．用量筒量取50ml自来水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。 8．用5ml吸管取4.5ml水于试管中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。 （三）器皿的准备 9．培养皿的包装 每6套一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里加盖扣严）。 10．吸管的包装 首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。 11．玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。 （四）培养基、无菌水、器皿的灭菌 12．将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。 13．灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面。 14．器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。 五、思考题 1．培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？ 2．加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？ 3．干热灭菌应该注意哪些事项？ 4．管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？ 实验九 土壤微生物的分离与生理生化实验(I) 一、实验目的 1.了解微生物分离的基本原理，掌握平板稀释分离技术。 2.掌握细菌鉴定中主要