【2017年整理】第5章 CellQuest Pro软件.doc

第5章 CellQuest Pro软件 5.1 概述 CellQuest Pro是从流式细胞仪上进行数据获取和分析的通用软件。CELLQuest Pro软件来从事仪器之调整与设定，可用以进行细胞检品的检验测量，CELLQuest Pro软件同时是细胞仪的数据处理系统内的必要软件。 在数据分析方面，CELLQuest Pro软件提供使用者双色或多色分析功能，可以定量各类细胞族群的百分比，细胞受染的荧光强度，也可以制作一维直方图、二维散点图、二维密度图、二维等高线图、及三维图谱，并且可作文字处理的中间插图，无需再剪贴拼凑，适用于论文发表，及会议报告使用。CELLQuest Pro软件功能强大且灵活，并与Macintosh 的多任务环境完全兼容。 收取 (Acquisition) 即收取并储存流式细胞仪上数据的过程。在收取前，需用您的样本来最佳化仪器的条件。 分析 (Analysis) 将收取的数据进行进一步分析。在分析时，将读取数据文件，然后可画Region (区)、 设置Marker (界限)、和进行统计。在CellQuest中，可画单参数直方图、双参数散点图、密度图和等高图。 从收取到分析 (Acquisition?Analysis) 在CellQuest中，从收取到分析的功能允许在数据收取结束后可从收取图转换到分析图。刚刚收取的数据及在收取时限定的格式出现在图中，如Region, Marker 等。 5.2 工具栏 工具栏在CellQuest Pro软件启动后就会出现，见图一。工具栏可用来画图、和等。选择点击，可选择一个或多个目标，进行改大小或移动。等高图点击，可画等高图，可自定义图的大小。 3 维图点击，可画3维图，可自定义图的大小。直方图点击，可画直方图，可自定义图的大小。密度图点击，可画密度图，可自定义图的大小点图：点击，可画点图，可自定义图的大小。 H：直方图 marker：点击，可在直方图上定位 marker 的左边界和右边界。 象限 marker：点击，可在点图、密度图和等高图上定位 marker 。缩小：点击，然后点击图，将放大图缩小到原大小。 放大：点击，然后点击图，将缩小图放大到原大小。R：矩形点击，然后在点图、密度图和等高图中点击，然后拖动对角线至所需 大小。 多边形点击，然后在点图、密度图和等高图中点击形成起始点，然后拖动鼠标 画出多边形顶点并在起始点处点击完成多边形 。 直方图点击，可在直方图上定位的左边界和右边界椭圆形点击，然后在点图、密度图和等高图中点击，然后拖动对角线至所需大小。 箭头点击，然后在实验文件中点击，拖出直线。文本：点击，然后点击定位插入点并编辑文字。 公式栏：点击，出现的对话框中可以输入客户定义的数学公式，在实验文档上出现的结果也可以添加注释。 计算器：如果自动复计算关闭，点击进行数据复计算。 是流式细胞仪的标准格式数据文件当Aqusition Control 窗口的et up前未打? 时，进行获取后自动保存的文件格式。该文件含有从流式细胞仪获取的平均2000-10000个颗粒数的数据。一个含有4参数10000细胞数的数据文件若256道分辨率则文件大小为45kb，若1024道分辨率则文件大小为85kb。 实验中设置的图、、、统计、marker、文字、颜色 等都将保存。数据文件不在实验文件中保存。CellQuest Pro实验文件的菜单File菜单下New、open、close、save及save as等(同Microsoft Word)。注意：实验文件和它的数据文件之间存在一定限制。若数据文件改变或被删除，实验文件可找到其数据文件。若二者联系丧失，需将丢失的数据文件其实验文件同一目录，实验文件才能找到其数据文件。若实验文件的目录改变，二者的联系不会改变，实验文件仍可找到其数据文件。 实验条件文件中包括仪器的电压，阈值，补偿等仪器条件。这些条件也已经自动保存在FCS数据文件中的文档部分。也可以单独保存成一个仪器条件文件。 5.3.4 统计文件 所有直方图、区域、门和象限统计结果都可以输出成表符限制性文档。这些输出文件可用于将数据转移到其他应用软件中，如电子表格或数据库。 5.4 CellQuest Pro的仪器控制 在CellQuest Pro软件中，仪器的控制选单位于Cytometer菜单中。用CellQuest Pro进行3色分析中，应用阴性对照和调补偿用对照进行仪器条件设置。阴性对照可用不加抗体组或同型对照组。它将用于调节FSC、SSC探测器、FSC阈值、设淋巴细胞区region、确认FL1/FL2/FL3的设置及象限设置。调补偿用对照包括单阳性荧光试剂，如包括下列试剂：CD8 FITC组、CD19 PE组、CD3 PerCP组。 调节探测器和放大