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第二章 基因工程制药 基因工程制药的药物都是用传统方法很难生产的珍贵稀有的药品，主要是医用活性蛋白和多肽类，包括：(1)免疫性蛋白，各种抗原和单克隆抗体。 (2)细胞因子，如各种干扰素,白细胞介素，集落刺激生长因子，表皮生长因子及凝血因子。（3）激素，如胰岛素，生长激素，心钠素。（4）酶类，如尿 激酶，链激酶，葡激酶，组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。 我国科学家经过8年刻苦攻关，成功地研制出世界上第一个采用中国健康人白细胞中克隆的A1B型干扰素基因，组建杂交质粒，传染大肠杆菌使之高效表达的人A1B干扰素。 基因工程技术是将所要重组对象的目的基因插入载体，拼接，转入新的宿主细胞，构建成工程菌，实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 基因工程药物制造的主要步骤：获得目的基因—组建重组质粒—构建基因工程菌—培养工程菌—产物分离纯化—除菌过滤—半成品检定—成品检定—包装。 简单叙事反转录法克隆基因的主要步骤：mRNA的纯化；CDNA第一链的合成；CDNA第二链的合成；CDNA克隆；将重组体导入宿主细胞；CDNA文库的鉴定；目的CDNA的分离和鉴定。 目前克隆真核基因常用的方法：化学合成和反转录法。 基因表达的微生物宿主细胞分为两类：原核生物，目前常用的有大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，链霉菌。真核生物，常用的有酵母，丝状真菌。 目前使用最广泛的宿主菌是大肠杆菌和酿酒酵母。 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素：（1）外源基因的剂量；（2）外源基因的表达效率：启动子的强弱；核糖体结合位点的有效性；SD序列和起始密码的间距；密码子组成。（3）表达产物的稳定性；（4）细胞的代谢负荷；（5）工程菌的培养条件。 融合蛋白：融合蛋白的氨基端是原核序列，羧基端是真核序列，这样的蛋白质是由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的。 非融合蛋白：是指在大肠杆菌中表达的蛋白以真核的mRNA的AUG为起始，在其氨基端不含任何细菌多肽序列。 质粒的不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。 质粒的分裂不稳定：是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象，它主要与两个因素有关，一是含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率，质粒丢失率与宿主菌，质粒特性和培养条件有关；二是这两种菌比生长速率差异的大小。 提高质粒稳定性的方法：选择合适的宿主菌；选择合适的载体；选择压力；分阶段控制培养；控制培养条件；固定化。 接种量：是指移入的种子液体积和培养液的体积的比例。 基因工程药物的分裂纯化特点：（1）目的产物在初始物料中含量低；（2）含目的产物的初始物料组成复杂；（3）目的产物的稳定性差；（4）种类繁多；（5）应用面广。 分离纯化的基本过程的5个步骤：包括细胞破碎，固液分离，浓缩与初步纯化，高度纯化直至得到纯品，成品加工。 产品的保存：（1）液态保存：低温保存；在稳定PH条件下保存；高浓度保存；加保护剂保存。（2）固态保存：干粉或结晶。 叙述干扰素的生理功能及基因工程干扰素的制备工艺流程？干扰素是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒，抗肿瘤和免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。干扰素工艺流程：启开种子—制备种子液—发酵培养—粗提—精提—半成品制备—半成品检定—分装—冻干—成品检定—成品包装。