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1、样品前处理目的、样品前处理方法都有哪些？常用C18固相萃取法原理、洗脱步骤、注意事项。 1．样品前处理目的：（1）浓缩痕量的被测组分，提高方法的灵敏度，降低检测限；（2）去除样本中的基体与其他干扰物质；（3）通过衍生化，使被测物转化成为检测灵敏度更高的物质或转化为与样本中干扰组分能够分离的物质，提高方法的灵敏度和选择性；（4）保护下游分析仪器以及测试系统、避免影响整机性能及寿命。 2．样品前处理方法：沉淀，液—液萃取，固相提取，渗析/超滤 ，电泳，蒸馏/蒸发 3．常用C18固相萃取法原理：固相提取：利用固相吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集的目的。利用杂质或目标化合物与样品基体溶剂和吸附剂之间亲和力的相对大小差异实现净化分离。 4．洗脱步骤： （1）活化:依次用强溶剂、弱溶剂（缓冲溶液）进行活化； （2）上样：用能够溶解样品的弱溶剂携带样品上柱，既要保证样品分析物的有效溶解，又要确保溶剂强度不至于把被分析化合物从柱上洗脱下来； （3）淋洗：用具有一定强度的混合溶剂淋洗去除干扰杂质，确保杂质被洗脱，而被分析化合物有效的保留在柱上； （4）洗脱：用较强的溶剂把被分析化合物从柱上替换洗脱下来。 5．注意事项： （1）根据分析目标物的理化性质选择合适的SPE柱； （2）一般SPE柱要防止干涸； （3）注意控制柱载量，防止穿透过载； （4）严格控制上样液和洗脱液滴速； （5）防止混浊样品堵塞柱子； 2、以高效液相色谱法测定某类药物含量为例，试述分析方法验证的内容。（查阅文献） 系统适应性： 1．准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示 2．精密度：是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。 A重复性 :在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度； B中间精密度：同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。 C重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。 3．专属性：指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测 定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指 该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。 4．检测限：试样中被测物能被检测出的最低量。常用%、ppm、ppb表示。 5．定量限：是一种含量测定的定量参数，指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应 具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。 6．标准曲线：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度 7．线性范围：指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 8．耐用性：指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。 3、简述高效色谱原理，从速率理论方程出发试述影响分离的因素 1.高效色谱原理: 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 H = A + B/u + C·u H：理论塔板高度， u：载气的线速度(cm/s (1).A = 2λdp dp：固定相的平均颗粒直径 λ：固定相的填充不均匀因子 固定相颗粒越小dp↓，填充的越均匀，A↓，H↓，柱效n↑。表现在涡流扩散所引起的色谱峰变宽现象减轻，色谱峰较窄。 (2). B = 2 γDg γ ：弯曲因子，填充柱色谱， γ 1。 Dg：试样组分分子在气相中的扩散系数（cm2·s-1） (1) 存在着浓度差，产生纵向扩散; (2) 扩散导致色谱峰变宽，H↑(n↓)，分离变差; (3) 分子扩散项与流速有关，流速↓，滞留时间↑，扩散↑; (4) 扩散系数：Dg ∝(M载气)-1/2 ； M载气↑，B值↓。 (3). C ·u —传质阻力项 传质阻力包括气相传质阻力Cg和液相传质阻力CL即： C =（Cg + CL） k为容量因子； Dg 、DL为扩散系数。 减小担体粒度，选择小分子量的气体作载气，可降低传质阻力。 4、简述色谱系统适用性试验。 答案1：定义：该实验是把分析设备、电子仪器、实验操作和被