一、Ames试验.ppt

* [注意事项及评价] 简便、经济、快速、可靠。 整体动物实验，比较符合活体的实际情况。 制备骨髓涂片关键在于使细胞分散均匀。 Giemsa染色时，应镜下监视。 Giemsa染色出现可疑阳性或弱阳性结果时，须用吖啶橙荧光染色以进一步肯定或否定阳性结果。 镜检时注意区分微核与异物。 对易通过骨髓屏障的药物，可补充用哺乳动物胚肝细胞微核试验进一步研究。 五、啮齿动物微核试验 * 六、啮齿类动物显性致死试验 [原理] 生殖细胞在减数分裂期和受精期最易发生突变，突变后失去与异性生殖细胞结合的能力，或者结合后会出现发育不正常的胚胎，以致造成总着床数减少或早期胚胎死亡及畸胎等现象。显性致死试验是观察哺乳动物生殖细胞染色体损伤的一种方法。 * 六、啮齿类动物显性致死试验 [动物] 性成熟小鼠。每组至少15只雄鼠，20只以上雌鼠。 [剂量] 高、中、低三个剂量组；高剂量应导致毒性症状或减低繁殖力。 [对照] 阳性对照与阴性对照。 [给药方式] 尽可能与临床一致。对雄鼠一般一天一次，连续5天。 * [交配方法] （1）在最后一次给药当天开始交配。 （2）每只雄鼠单独饲养，与2 ~ 3只未交配过的雌鼠同笼，5 d后取出雌鼠，间隔1 ~ 2 d后再放入第二批雌鼠，如此持续6 ~ 8 w。 [结果观察与解剖] 雌雄同笼后，以阴栓出现作为妊娠第1天；于妊娠第14天处死雌鼠，观察双角子宫内着床数、吸收胎、晚期死胎及活胎数；以给药雄鼠为单位，交配1 ~ 8周分别统计如下指标： 六、啮齿类动物显性致死试验 * （六）啮齿类动物显性致死试验 1 平均受孕数（%）= 受孕母鼠总数 同笼母鼠总数 ×100 % 2 平均着床数 = 总着床数（早死、迟死、活胎数） 受孕母鼠总数 3 平均活胎数 = 活胎总数 受孕母鼠总数 6 突变指数（MI）= 总死胎数 总着床数 ×100 % 7 显性致死率（DL，%）= （1 - 实验组平均生存胎仔数 阴性对照妊娠鼠的平均生存胎仔数 ）×100 4 平均死胎数 = 死胎总数 受孕母鼠总数 5 含死胎孕鼠数（%）= ×100 % 含1个以上死胎（早死、迟死）孕鼠数 受孕母鼠总数 * [结果判定] 生存胎仔总数减少，死亡胎仔数增加；胚胎总着床数（活胎、早期死亡胚胎和晚期死亡胚胎的总和）减少或未着床胚胎数增加。 [方法评价] 体内试验，不需物殊设备，观察容易，结果明确，能反应遗传损伤的直接后果。 检查各交配的显性致死情况，有助于分析精子在哪个发育阶段受到毒性作用： 灵敏度低，只限于观察生殖细胞 3周：精子和精细胞的作用 4 ~ 5 周：精细胞 6周：精原细胞和干细胞 六、啮齿类动物显性致死试验 * 七、果蝇伴隐性致死试验 F1 F2 隐性伴性遗传特征 * 七、果蝇伴隐性致死试验 [原理] 果蝇伴隐性致死试验（sex-linked recessive lethal test，SLRL）是利用隐性基因在伴性遗传中的交叉遗传特征而设计的。雄蝇的X染色体传给F1代雌蝇， F1代雌蝇为杂合性，不表达；F1代雌蝇将此基因传给F2代雄蝇， 因此，位于X染色体上的隐性基因能在F2代半合子雄蝇中表达出来。 如果亲代雄性果蝇接受药物后X染色体上出现隐性致死性突变，则在F1代雄蝇中不表达，但在F2代雄蝇中有一半果蝇接受了这个已经发生突变的X染色体，结果F2代雄蝇数目比雌蝇少了一半，因此可据此推断致死突变的存在。 * [动物] Okegon – K 雄性果蝇及Muller – 5雌性果蝇 [给药] 口服或其它接近临床用药途径（注射、气体等）。 [剂量] 至少2个剂量，高剂量通常为1/2 LD50，低剂量为1/4 LD50，无毒物最大给药量可为5%。 [对照] 阴性对照及阳性对照。 七、果蝇伴隐性致死试验 * [预试] 毒性试验 —— 求LD50 繁殖力试验 —— 观察受孕与不孕情况 样本大小 —— 受试染色体总数给药组和阴性对照组6000以上，阳性对照组300以上，观察给予药物的果蝇与处女蝇的交配，每 2~ 3天更换一批处女蝇