淀粉微生物检验操作规程..docVIP

淀粉微生物检验操作规程 1大肠菌群测定 1.1设备和材料 冰箱：2℃~5℃； 恒温培养箱：36℃+1℃。 恒温水浴锅：46℃+1℃； 天平：感量0.1g。 灭菌锥形瓶：500ml； 灭菌玻璃珠：直径约5mm。 灭菌平皿：直径90mm； 灭菌试管：16 mm×160 mm。 载玻片、盖玻片； 灭菌牛皮袋、塑料袋。 无菌吸管：1 ml（具0.01 ml刻度）、10 ml（具0.1 ml刻度） 灭菌金属勺、刀等。 1.2培养基和试剂 1.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤。 1.2.2煌绿乳糖胆盐肉汤。 1.2.3结晶紫中性红胆盐琼脂。 1.2.4无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min 1.2.51mol/l氢氧化钠：称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。 1.2.61ml盐酸：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml。 三、检验程序 四、操作步骤： 1、以无菌操作称取检样25g（ml），放入含225ml灭菌生理盐水的具玻璃塞锥形瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。 2、样品匀液的PH值应在6.5~7.5之间,必要时分别用1氢氧化钠或1盐酸调节。 3、用1无菌吸管吸取1：10样品匀液1，沿管壁缓缓注入9磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管洒端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1无菌吸管反复吹打，使其混匀均匀，制成1：100的样品液。 4、根据对样品污染状况的估计，从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15分钟。 5、复发酵试验：用接种环从所有48h+2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36℃+1℃培养48h+2h，观察产气情况，产气者，计为大肠菌群阳性管。 6、大肠菌群最可能数（MPN）表（见附录B），报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的MPN值。 大肠菌群最可能数（MPN）的检索表 阳性管数 MPN 95%可信限 阳性管数 MPN 95%可信限 0.1 0.01 0.001 下限 上限 0.1 0.01 0.001 下限 上限 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 0 0 1 1 2 3 0 0 0 1 1 2 2 3 0 0 0 1 1 1 0 1 0 1 0 0 0 1 2 0 1 0 1 0 0 1 2 0 1 2 3.0 3.0 3.0 6.1 6.2 9.4 3.6 7.2 11 7.4 11 11 15 16 9.2 14 20 15 20 27 ------- 0.15 0.15 1.2 1.2 3.6 0.17 1.3 3.6 1.3 3.6 3.6 4.5 4.5 1.4 3.6 4.5 3.7 4.5 8.7 9.5 9.6 11 18 18 38 18 18 38 20 38 42 42 42 38 42 42 42 42 94 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 2 2 2 3 3 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 1 2 0 1 0 1 2 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 21 28 35 29 36 23 38 64 43 75 120 160 93 150 210 290 240 460 1100 1100 4.5 8.7 8.7 8.7 8.7 4.6 8.7 17 9 17 37 40 18 37 40 90 42 90 180 420 42 94 94 94 94 94 110 180 180 200 420 420 420 420 430 1000 1000 2000 4100 ------- 注1：本表采用3个稀释度[0.1g(或0.1ml)、0.01g（或0.01ml）和0.001g（或0.001ml）]，每个稀释度接种3管。 注2：表内所列检样量如该用[1g(或1ml)、0.1g（或0.1ml）和0.01g（或0.01ml）]时，表内数字应降低10倍；如改用[0.01g(或0.01ml)、0.001g（或0.001ml）和0.0001g（或0.0001ml）]时，则表内数字相应增高10倍，其余类推。 2霉菌测定 2.1设备和材料 冰箱：0℃~4℃； 恒温培养箱：25℃+28℃ 显微镜：10×~100×； 架盘药物天平：0g~500g，精确至0.5g。 灭菌锥形瓶：500ml； 灭菌玻璃珠：直径约5mm 灭菌平皿：直径90mm； 灭菌试管：16 mm×1