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《细胞工程》考试大纲 ★★绪论 一、名词 高技术：是指那些能带来高经济效益、具有高增值作用，并能向经济和社会各领域广泛渗透的新技术。 生物技术：指通过技术手段，利用生物体或生物过程来生产有经济价值产品或创造新物种的综合技术。 细胞工程：是指按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行的实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。 生化工程：是由生物科学与生化工程相结合的交叉学科，研究生物技术的实验成果转化为生产力过程的工程技术问题。 二、知识点 01生物技术的基本内容： 生物技术的基本内容包括广义和狭义两个方面，狭义指基因重组、细胞融合、固定化酶与细胞、生物反应器等技术领域。广义包括资源、能量、粮食、饲料生产以及为净化环境所进行的物质分解及发酵技术等。 02细胞工程主要的技术领域： （1）细胞（组织、器官）培养：in vivo 在体、活体、生物体内 in vitro 离体、生物体外 （2）细胞融合（体细胞杂交、细胞并合） (3) 细胞拆合（细胞质工程、细胞器移植） 03细胞工程的主要应用: 1 优质植物快速培育及繁殖 2 动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种 3 动、植物细胞培养生产活性产品、药品 4 新型动、植物品种的培育 5 组织工程提供医学器官修复或移植 第一章 细胞培养的基本设施及条件 一、名词 11生物安全：指为了使病原微生物在实验受到安全控制而采取的一系列措施。 11 p1级实验室：对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康人、动植物致病的致病因。1、限制随便出入实验室；2、操作前后要消毒；3、不能用口吸取液体；4、禁止在室内进食、吸烟和存放食品；5、操作时着专门实验服；6、处理细胞前后要洗手；7、操作时在超净工作台。 第二章 清洗与消毒 一、名词 21清洁液：由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配制而成的具有强氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用的液体物质。 22干热灭菌：主要适用于玻璃器皿的消毒灭菌。用电热鼓风干燥箱加温到160℃，保持1小时或更长时间，可达到消毒目的。 23湿热灭菌：湿热灭菌即高压蒸气灭菌，是最常用和最有效的一种方法。 二、知识点 24 细胞培养室常见的消毒方法 （1）物理灭菌法：紫外线、电离辐射、湿热、干热、过滤除菌法； （2）化学消毒法：消毒剂、抗生素 25玻璃器皿的清洗方法 玻璃器皿的清洗，要求玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行，一般玻璃器皿的清洗包括：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。 ①浸泡—初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉。②刷洗—浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷和优质洗涤剂（加热）刷洗。③浸酸—刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的强氧化作用可被除掉。④ 冲洗—玻璃器皿浸酸后必须用流水充分冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，必须重复十次以上，不留任何残迹。最后用蒸馏水漂洗2~3次，用双蒸水漂洗1次，烤干备用。 玻璃滤器原则上与玻璃器皿清洗相同。无论是浸泡还是浸酸、冲洗，都需用抽滤的方法。 ★★第三章 细胞培养的基本方法 一、名词 31无菌操作技术：指在细胞培养的工程中，为了防止培养物被污染而采取的无菌操作 方法和技巧。 32细胞贴壁率：又称接种存活率，指直接反映细胞生存能力的贴壁生长细胞数占接种 总数的百分率。 33细胞计数：细胞计数是指用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，以测定细胞 增殖和细胞浓度的一种方法。 34 MTT法：根据活细胞内线粒体脱氢酶活性，可将染料MTT还原为难容的蓝紫色结 晶物质而沉淀在细胞内，经酸性异丙醇溶解后呈现的色度，来反映生活细胞代谢水 平的一种方法即为MTT法。 35活体染色：在体外条件下用某种染色剂对活的组织或细胞进行染色,而对活细胞的生 理活动不产生任何明显影响的染色方法。 36成集落试验：在集落刺激因子存在下培养细胞，可刺激培养细胞分化产生大小不同的 细胞集落，这样的集落形成细胞称体外培养集落形成细胞，这种用于检验培养细 胞能否增殖的试验方法即为成集落试验。 37污染：指一切进入培养系统后影响培养物的正常生理机能的与培养无关的杂质（微生 物、化学物、细胞等）。 二、知识点 38 无菌操作的技术要领与要求 1、培养前的准备—根据研究内容的要求充分做好培养前的实验用品准备工作； 2、超净工作台的消毒 3、洗手和着装—先用肥皂刷洗手和前臂，再用流水冲洗，然后用0.2％新洁尔灭或75％洒精棉球擦洗。穿无菌服，戴无菌帽和口罩。 4、火焰消