移植免疫及其免疫检测__培训课件.pptVIP

(一) 限制性片段长度多态性分析 基本原理 根据HLA核苷酸碱基序列，在不同部位存在多个不同的酶切位点。 由于不同等位基因碱基序列的不同和限制性内切酶酶切位点分布不同，使限制性内切酶的识别位点和酶切点数目改变，因此，产生了数量和长度均不同的酶切片段，出现了不同的DNA条带型。 由此，可鉴定HLA基因的特异性。 PCR-RFLP：采用PCR技术扩增目的DNA，扩增产物经限制性内切酶消化切割，直接在电泳上进行RFLP分析，大大提高了目的DNA含量和相对特异性，使临床应用更为方便。 （二）聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP) 原理: 在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳时，单链DNA形成一定的空间结构，具有一定的构象。相同长度的单链DNA因其碱基顺序不同，甚至单个碱基不同，所形成的构象不同，电泳时泳动速度和迁移率也不相同。 通过PCR扩增，变性后进行SSCP分析。 因此，供受者的SSCP带型一致者，其HLA基因相匹配，而电泳带型出现差异者，则不匹配。 (三)聚合酶链反应寡核苷酸探针杂交 （PCR-SSO） 原理: 采用PCR技术，以位点间或组间特异引物扩增目的基因DNA，其产物转移到固相支持体上，利用序列特异性寡核苷酸, 通过Southern杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。 方法学评价: PCR-SSO用于HLA基因分型，技术成熟、稳定、灵敏度高、特异性好，结果精确，可靠，样品需量甚微，易于普及。 是目前应用最为普遍的分型之一。 其他方法： 1.顺序特异引物聚合酶链反应技术 2.DNA序列测定 思考题 1.移植抗原 2.HLA分型的方法 THE END! * * * * （一）超急性排斥反应 1 概念 超急性排斥反应，又称抗体介导的排斥反应，指移植物在恢复血供后几分钟到数小时之内发生的不可逆的体液排斥反应。 1)经典超急性排斥反应 发生于移植后24 h以内,由于发生时间早，故较常见于手术中。其肉眼观表现为恢复血供后，移植物颜色由正常逐渐变为暗红、青紫，质地变软，体积增大，同时伴随功能丧失。由于无有效治疗措施，如发生于手术中，往往立即摘除移植物。 2）延迟超急性排斥反应 发生于移植术后24~48 h内者，受者表现术后高热、寒战、移植区剧烈疼痛、移植物功能丧失，被迫再次手术摘除移植物。 2 机制 与受者体内预存的抗供者组织抗原的抗体有关，即由Ⅱ型超敏反应引起。首先抗体与移植物血管内皮抗原结合导致内皮细胞活化，引起一系列级联反应。 3 病理学变化 这些级联反应使血管通透性增加，血管内皮细胞损伤，促使血管内血小板和中性粒细胞聚集，纤维蛋白沉积，引起广泛血管内凝血和血栓形成，造成组织缺血和广泛梗死，最终导致移植物功能迅速丧失。 （二）急性排斥反应 1 概念 急性排斥(acute rejection)是最常见的排斥类型。一般在移植后数天到几个月内发生，进展迅速，术后3个月强度逐渐减弱，但术后1年内常反复出现。 临床表现： 突发寒战、高热，局部胀痛，移植物肿大、功能减退，如肝移植表现为黄疸明显加深，血清转氨酶和胆红素快速上升；肾移植表现为尿量减少，血肌酐和尿素氮增高；胰腺移植首先表现为外分泌功能减退，然后血糖增高。 2 机制 目前研究表明，细胞免疫和体液免疫均参与了急性排斥反应。细胞免疫的中心环节是CD4+T淋巴细胞的激活。一般要经历三个过程：抗原呈递；T细胞激活、增殖和分化；效应阶段。 (1)抗原呈递 直接途径 间接途径 T细胞对非已MHC抗原识别的两种途径 返回 (2)效应阶段 活化的Th1细胞和CTL在趋化因子作用下，迁移到移植物局部，损伤移植物。 3 . 病理学改变 1)炎性浸润: 以单核细胞为主，此外还有淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞和嗜酸粒细胞。 2)血管炎: 主要是中、小血管受累，尤其是中、小动脉为主的血管内膜炎。 (三)慢性排斥反应 1.概念 慢性排斥多发生于移植6-12个月以后，病程进展缓慢，常呈隐匿性，表现为移植物功能进行性丧失。 2 机制 慢性排斥反应的发病学机制比较复杂，是移植物对损伤的综合反应，为免疫和非免疫机制共同作用的多因素、多步骤过程。 3 病理变化 病理变化主要特征为增生，表现为移植物持续性血管周围炎症反应，广泛的中心性动脉间质纤维化。移植物局部缺血、坏死、纤维化。 二、　移植物抗宿主反应 1.概述 移植物抗宿主排斥(Graft Versus Host Rejection，GVHR)是移植物中的免疫活性细胞识别宿主组织，并发起免疫攻击，导致宿主器官组织损伤的一种免疫反应，亦称移植物