4抗体生物制品要点.pptVIP

4.抗体生物制品 1.抗体的结构、分类与功能 Epitope, Antigenic determinant抗原决定簇 一个抗原分子上可能有数个抗原决定簇 每个抗原决定簇至少诱生一种专一性抗体 蛋白质性抗原决定簇含有六个以上氨基酸 ３.单克隆抗体 单克隆抗体是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞 融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细 胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。由于 这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又 是单一的B淋巴细胞克隆产生的，因此称为单 克隆抗体。它是结构和特异性完全相同的高 纯度抗体。 单克隆抗体技术操作流程 ４.基因工程抗体 非展示系统 展示系统 单克隆抗体 噬菌体抗体 杂交瘤技术 展示技术 宿主细胞: 杂交瘤 细菌 筛选范围 : ~103 107?109 时间: 几个月 几周 操作: 繁杂 相对简单 免疫: 必须 可避免 人源抗体: ? + 费用: 高 低 生产量: 有限 无限 基因获取: 再克隆 直接 应用前景: 有限 不可估 噬菌体（M13, T7, T4, ?) 病毒（反转录病毒，杆状病毒） 表面展示系统 细菌（葡萄球菌，E. Coli) 酵母 体外共价连接（蛋白—DNA, 蛋白—RNA) 噬菌体展示技术的应用现状 噬菌体抗体库的选择过程 B B B B B B v v Immunotube coated with antigen coated with steptavidin and biotinylated antigen B biotin antigen Solution phase selection with biotinylated antigen Bind to Streptavidin coated microtitre wells Wash to remove unbound phage particles. Elute bound phage Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity E.coli 感染 和扩增 噬菌体展示技术最关键的优势有三： 淘选的高效率使得在极低的存在 水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能； 所挑选到的噬菌体可在微量存在的情况下，通过感染细菌得到富集； 展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接，使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。 　定点突变法是将人的可变区基因克隆，根据鼠抗体的CDR 序列合成几种突变引物，用定点突变的方法将人的可变区基因的CDR序列变为鼠抗体的CDR序列，然后表达出改型抗体。 　研究表明，在构建改形抗体时，简单地进行CDR替换并不能保证抗体具有好的亲和力，因此在构建时还必需包括对影响抗原结合位点的空间结构的框架序列进行操作。 　小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、