维生素B12的发酵..docVIP

维生素B12 的发酵及应用 吉韬 （2010310126 10生物技术） 摘要：本文综述维生素B12的基本性质，生物合成途径以及发酵生产工艺，并对B12的应用与市场前景做了分析 关键词: 维生素B12 发酵 提取 抗生素 一、引言 维生素B12是一种水溶性维生素。只需少量即能产生效果 为深红色结晶或结晶粉末又称为红色维生素（red vitamin）或氰钴胺维生素 B12具有广泛的生理作用，它参与体内甲基转换及叶酸代谢，促进神经髓鞘中脂蛋白的形成，保持中枢神经和外周髓鞘神经纤维的功能完整，参与广泛的蛋白质及脂肪代谢等。 计量单位为微克（mcg——microgram，即1/1000000克）。 1. 结构与性质 维生素B12（VB12）为钴胺素（Cobalamin）类化合物，他的分子中有4个还原性吡咯环联结在一起，这种构叫做咕啉，他与核苷酸（二甲基苯异咪唑）及核糖相联，另一方面与D-1-氨基-2-丙醇相连，钴与核苷酸之N相偶联。化学上称氰钴胺素为维生素B12，除CN后称钴胺至少。CN可为其他基团代替，成为不同类型的钴胺素。一般称对哺乳类有生理作用的为钴胺素，称对哺乳类及微生物都有作用的为维生素B12。本文中维生素B12泛称此类物。 氰钴胺至少自然界很少，为人工合成产品，可从其他类型转换而来。他是红色结晶，其活力为重金属及氧化还原剂所破坏，但在短期高压消毒（12℃）不被破坏，能在1：80水中，为中性，在PH4.5～5时最稳定。 辅酶B12（即5‘-脱氧腺钳钴胺素）及甲基B12（甲基钴胺素）为（人类）组织中最主要的辅酶形式。前者在线粒体内，后者在胞浆内，为合成蛋氨酸所必需者。它们对光不稳定，光解后形成水钴胺素。在氰存在下变成氰钴胺素，维生素B12、B12a、B12b、B12c都可治疗维生素B12的缺乏。 氰钴胺素分子式（CN可以其他基团代替）氰钴胺素分子式（CN可以其他基团代替） 是提高叶酸利用率，与叶酸一起合成甲硫氨酸（由合成）和胆碱，产生嘌呤和嘧啶的过程中合成氰钴胺申基先驱物质如甲基钴胺和酶B12，参与许多重要化合物的过程。维生素B12缺乏时，从甲基四氢叶酸上转移甲基的活动减少，使叶酸变成不能利用的形式，导叶酸缺乏症 抗生素废液中提取 早在1952年美国T.R.Wood等人就发现,当用加有钴化合物的培养基培养灰色链霉菌时,可大大提高维生素B12在整个培养液中的浓度,但是对于钴化合物的浓度要求要适量,过高的浓度会对菌体细胞产生毒性;另有研究表明,添加适量的氰化合物也同样可促进抗生素废液中B12类似物的含量,但需严格掌握其用量 (二)放线菌发酵 自从人们发现可从抗生素废液中提取得到维生素B12后,许多科学家将目光转向了采用放线菌,其中主要是链霉菌属中的灰色链霉菌和橄榄色链霉菌来发酵产维生素B12,而于链霉素的生成,而始终未能使得维生素B12的产生处于主导地位,因此,我们应选出链霉素发酵支路的关键酶,并将其抑制,这样便可大大提高维生素B12的得率,使得大量产生维生素B12成为可能 下水道废液中提取采用生物活性污泥法处理的废水中,通常含有多的B12,干的活性污泥可先用水浸提,然后过滤掉固形颗粒,之后可分离、纯化此得到的B12有如下特点:1、无需前培养,这样大大减少了前期投入;2能耗大,尤其是浓缩这一关键性步骤将造成大的能量损耗;3、用此法得到的B12的浓度虽并不低,但受活性污泥这一来源的影响,由此获得的B12并不能直接进入食品或药品级产品,而通常只局限于饲料添加剂 丙酸菌发酵[ (五）巨大芽孢杆菌生产 B12以巨大芽孢杆菌为例,将培养基用氨水调至pH7.0,发酵液需要连续不停地搅拌和大量通气,温度需控制在30℃左右,每隔一定时间需用5%的氨水来调pH,同时需定期补充碳、氮源,以期达到最高产量采用转基因的发酵生产目前,人们对于B12的控制基因已经非常清因此,这就使得将其转入大肠杆菌,以期大量生产,但该方法真正用于大生产还有待时日,即使用于生产,也会不可避免地存在这样的问题,如导入的质粒不能稳定地遗传下去,会随发酵条件的变化而脱落等,因此,就近些年,维生素B12的生产仍需按传统发酵来完成维生素B12的提取 对于维生素B12提取,不断有新的方法提出,主要有两种,一种为溶剂提取法,另一种为离子交换树脂法 (一)有机溶剂提取 研究表明,采用两相混合溶剂,可简单地纯化和提取出来,常用的溶剂为苯甲醇和水的混合溶液,基本过程如下:发酵液—吸附(活性碳)—洗脱(吡啶)—浓缩—层析(Al2O3)—洗脱(甲醇)—收集红色液—浓缩—结晶 （二离子交换树脂法子交换树脂法提取随着离子交换柱在工业上的广泛应用,人们尝试用阴阳离子交换树脂来进行维生素的提取,并取得了较好的效果,过程如下所示:发酵液—阳离子树脂(Lo