脑脊液常规检查标准操作手册..docVIP

脑脊液常规检查标准操作手册 1.目的：建立脑脊液常规检查的标准化操作； 2.范围：适用于脑脊液的常规检查(物理检查、蛋白定性、细胞检查)； 3.标本采集： 3.1 标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。 3.2 标本要求：将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1-2毫升。 3.3 遇高蛋白标本时可采用EDTA K2抗凝。 4.标本储存：立即送检。 5.标本运输：室温运输。 5.标本拒收标准：污染，久置标本。 6.器材试剂：5%苯酚溶液：取纯苯酚25ml,加蒸馏水至500ml，用力振摇，置37℃温箱内1-2天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。细胞计数板；显微镜。 7.物理检查： 7.1 目测脑脊液颜色与透明度: (1)观察颜色。 (2)观察透明度。 (3)观察凝块或薄膜：收集脑脊液于试管内，静置12-24小时，正常脑脊液不形成薄膜、凝块和沉淀物。 7.2 结果判断与分析： 7.2.1颜色：正常脑脊液是无色透明的液体。在病理情况下，脑脊液可呈不同颜色改变: (1)红色：常由于各种出血引起。脑脊液中出现多量的红细胞，主要由于穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或脑室出血引起。前者在留取三管标本时，第一管为血性，以后两管颜色逐渐变淡，红细胞计数结果也依次减少，经离心后上清液呈无色透明。当蛛网膜下腔或脑室出血时，三管呈均匀红色，离心后上清液显淡红色或黄色。红细胞在某些脑脊液中5分钟后，即可出现皱缩现象，因此红细胞皱缩现象不能用以鉴别陈旧性或新鲜出血。 (2)黄色：可因出血、梗阻、郁滞、黄疸等引起。陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血，由于红细胞缺乏蛋白质和脂类对膜稳定性的保护，很易破坏、溶解，出血4-8小时即可出现黄色。停止出血后，这种黄色仍可持续3周左右。椎管梗阻如髓外肿瘤，格林-巴利综合征，当脑脊液蛋白质量超过1.5g/L时，颜色变黄，其黄色程度与蛋白质含量呈正比。化脓性脑膜炎、重症结核性脑膜炎时，因脑脊液蛋白质含量明显增加而呈淡黄色或黄色。重症如核黄疸、新生儿溶血病时脑脊液也呈黄染。 (3)白色或灰白色：多因白细胞增加所致常见于化脓性脑膜炎。 (4)褐色或黑色：常见于脑膜黑色素瘤。 7.2.2 透明度：正常脑脊液应清晰透明。病毒性脑炎、神经梅毒等疾病的脑脊液也可呈透明外观。脑脊液中白细胞如超过300×106/L时可变为混浊；蛋白质含量增加或含有大量细菌、真菌等也可使其混浊；结核性脑膜炎常呈毛玻璃样微混；而化脓性脑膜炎常呈明显混浊。 填写报告时用“清晰透明”、“微浑”、“浑浊”等描述。 7.2.3 凝块或薄膜：正常脑脊液不形成薄膜、凝块和沉淀物。若脑脊液内蛋白质包括纤维蛋白质多于10g/L即可出现凝块或沉淀物，结核性脑膜炎的脑脊液静置12-24小时后，可见表面有纤维的网膜形成，取此膜涂片检查结核杆菌，阳性率较高。蛛网膜下隙梗阻时，由于阻塞，远端的脑脊液蛋白质含量常高达15g/L，此时脑脊液呈黄色胶冻状。 填写报告百可用“无凝块”、“有凝块”、“有薄膜”、“胶冻状”等描述。 8.蛋白定性试验(潘氏法)： 8.1实验原理：脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀。 8.2试验方法：取潘氏试剂2-3ml于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液1-2滴，衬以黑背景，立即观察结果。 8.3结果判断： 阴性：清晰透明，不显雾状； 极弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到； 弱阳性（+）：灰白色云雾状； 阳性（+）：白色浑浊； 强阳性（3+）：白色浓絮状沉淀； 最强阳性（4+）：白色凝块； 9.细胞检查：在显微镜下对脑脊液有形成分进行计数和分类检查。 9.1 细胞总数： 9.1.1 对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每μl的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每μl脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘以106。也可用生理盐水或红细胞稀释液稀释后再用人工计数，或直接用血细胞分析仪进行计数； 9.1.2 浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每μl脑脊液的细胞总数。 9.2 白细胞数： 9.2.1 非血性标本：小试管内放入冰乙酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。 9.2.2 血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行