链霉菌的分工子育种策略.docVIP

链霉菌Method of Streptomyces’s molecular breeding Abstract:Now The breeding of Streptomyces has entered the stage of molecular breeding. The process includes: Using gene disruption, knockout, replacement mutation technology to understand gene function, expression, regulation and control and then have the, modification of antibiotics. The secondary metabolite biosynthesis gene cluster is transferred to the easy industrial operation of the host system, introducing the resistance gene, gene regulation and introducing the hemoglobin gene;Use of genetic screening programs, screening of specific types of compounds containing the gene producing strain, and obtained the corresponding secondary metabolites;Use of genome shuffling on the starting strain processing and so on . the conjugative transfer system research of Streptomyces has opened a new direction for molecular breeding System changes in gene structure can produce a complete mutant library, so as to construct the mass production of different antibiotic engineering bacteria. Key words: Streptomyces；molecular breeding,；DNA 链霉菌是一类细胞壁类型为I型、革兰氏阳性、好气的最高等的放线菌。它是一种重要的资源微生物，具有广泛的物种多样性和代谢多样性，已知放线菌所产抗生素的90％由本属产生。1］但随着抗生素的高剂量大面积使用，抗生素的使用寿命也随之缩短，从而使得快速选育高产量、产新抗生素的链霉菌显得尤其重要。随着基因工程技术和分子生物学手段的不断发展以及对微生物次生代谢机制的进一步了解，链霉菌的选育已由原来随机诱变筛选进入到分子育种阶段。 分子育种，就是将基因工程应用于育种工作中，通过基因导入，从而培育出一定要求的新品种的育种方法。1 扩增表达次生代谢过程限速酶的基因 抗生素在链霉菌体内的生物合成是由一系列酶催化产生的，在整个合成过程所用酶系中，限速酶的浓度大小是影响抗生素产量的重要因素[5]。深入了解限速酶基因，通过扩增该酶基因的拷贝数，可提高目的抗生素产量。1993年，Malmberg 等[6]对带小棒链霉菌（S.clavuligerus）生物合成头霉素和头孢霉素的过程进行研究， 结果发现α-氨基乙二酸前体的产生是生物合成的限速步骤之一。他们从带小棒链霉菌中克隆了赖氨酸氨基转移酶LAT 编码基因，并使之在宿主染色体上多拷贝表达，增加了LAT 酶数量，提高了头孢霉素的产量。 2 敲除负调控基因 敲除负调控基因，抑制无关代谢活动可增加细胞对目标产物合成在能量和碳源上的供应，从而提高目的抗生素的产量。2001 年，Paradkar 等[7]对带小棒链霉菌次生代谢产物进行研究发现，带小棒链霉菌同时合成2种结构上无关的次生代谢产物头孢霉素C 和克拉维酸，虽然这2 种次生代谢产物的生物合成具有完全独立的途径，但它们通过相互竞争初生代谢的能量和碳源来进行次生代谢的合成活动。通过敲除头孢霉素C 合成所必需的基因lat，可以完全停止头孢霉素C 的合成，而在lat 突变株中克拉维酸的产量提高了2-2.5倍。 3 将整个次生代谢产物合成基因簇转移至易于工业化操作的宿主系统 天蓝色链霉菌是最早应用于次生代谢产物异源合成的宿主系统的模式菌。1993年，McDaniel等[8]通过基因敲除放线紫红素合成基因构建了工程表达宿主天蓝菌CH999，还成