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培养基营养性试验验证方案 方案编号： 　　　 起草人: 　　　　　 部门： 姓名： 年 　月　 日 审核人： 　　　　 部门： 姓名： 　　　年　 月　 日 部门： 姓名： 　　　年　 月　 日 批准人： 　　　　 部门： QA： 姓名： 姓名： 年　 月　 日 年 月 日 培养基营养性试验验证方案 目录 概述 目的 范围 职责 培养基营养性试验 1 概述 我公司生产主要品种为药用碳酸钙，微生物主要控制项目为细菌总数、霉菌、酵母菌及大肠杆菌，在建立微生物测试方法前需进行培养基营养性试验。 2. 目的： 制定培养基营养性试验验证方案，以文件化的证据确认： 培养基营养性满足菌种生长要求； 3．范围 本方案适用于药用碳酸钙微生物限度检测中培养基营养性试验的验证。 4．职责 为了微生物测试方法验证的有效执行，相关部门和人员职责分工见表1。 表1 职责分工 职 责 负责部门 负责人 起草验证方案 上海碳酸钙厂 QC 微生物分析员 起草验证报告 上海碳酸钙厂 QC 微生物分析员 实施验证 上海碳酸钙厂 QC 审核验证方案 上海碳酸钙厂 QC 主管 审核验证报告 上海碳酸钙厂 QC 主管 批准验证方案 上海碳酸钙厂 QA 经理 批准验证报告 上海碳酸钙厂 QA 经理 5 培养基营养试验 5.1 资料确认 表2 资料确认 项目 编号 确认人/日期 复核人/日期 微生物检测标准操作规程 培养基配制标准操作程序 无菌室操作标准操作规程 菌种管理规程 5.2 仪器确认 表3 仪器确认 设备名称 编号 验证报告编号 确认人/日期 复核人/日期 热空气消毒箱 高压蒸汽灭菌器 恒温培养箱 霉菌培养箱 恒温培养箱（控制菌） 净化工作台 空调系统 5.3 菌种确认 表4 菌种确认 菌种名称 代数 批号 有效期 确认人/日期 复核人/日期 铜绿假单胞菌 [CMCC(B) 10 104] 金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26 003] 枯草芽孢杆菌 [CMCC(B) 63 501] 白色念珠菌 [CMCC(B) 98 001] 5.4 营养试验培养基的配制与灭菌 表5-1 培养基名称 批号 有效期 配制人/日期 复核人/日期 营养肉汤培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 表5-2 培养基名称 批号 有效期 配制人/日期 复核人/日期 营养肉汤培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 表5-3 培养基名称 批号 有效期 配制人/日期 复核人/日期 营养肉汤培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 操作步骤 5.5.1 菌液制备 接种铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10 104]、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养18~24小时；黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基，培养5~7天。用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌10~100cfu的菌悬液。 5.5.2 制作平板 从上述菌悬液中分别吸取1ml到两个空白碟子中，浇制两个平板，铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10 104]、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌用营养琼脂培养基浇制，白色念珠菌、黑曲霉用玫瑰红钠琼脂培养基浇制，每个培养皿浇制15-20ml培养基。 5.5.3 培养条件 铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10 104]、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倒置于30℃-35℃培养48小时，白色念珠菌、黑曲霉倒置于23℃-28℃培养72小时，必要时培养5～7天。 5.5.4 阴性对照试验 分别吸取1ml 0.9%的无菌氯化钠溶液至两只空白碟子中，分