氧化应激条件下酵母辅酶Q生物合成甲基转移酶试题.docVIP

分子生物学实验论文 题目：酵母辅酶Q生物合成甲基转移酶的分离 及SDS分析 姓 名: 学 号: 专 业： 年级班级： 指导教师： 目 录 分子生物学实验论文 1 摘要 3 引言 3 一、材料方法 3 1、1仪器 3 1、2方法 3 1、3培养基 3 二、酵母的生长 4 2、1 酵母的活化 4 2、2 纯化 4 2、3氯化铜对酵母的影响 4 2、4 液培 5 2、5吸光度的测定 5 三、SDS电泳 6 3、1电泳前准备 6 3、2 SDS电泳操作步骤 6 四、结果分析 7 4、1酵母的分离结果 7 4、2液体培养基中的结果分析 8 4、3 SDS电泳结果分析 8 五、结论 8 氧化应激条件下酵母辅酶Q生物合成甲基转移酶 摘要 甲基转移酶是生物有机体内普遍存在的一种重要酶类，它能催化遗传物质ＤＮＡ的甲基化，在基因表达及动物生长、发育中起着重要的调控作用；同时，又能催化多种生理过程中间产物的甲基化进而合成或降解生理活性物质。研究发现，人类的情绪和许多疾病的发生及植物的抗逆性都与甲基转移酶基因的表达有关。 本试验以安琪酵母为实验材料，测定不同浓度的氯化铜对安琪酵分子生物学母的生长的影响，通过分光光度计测定不同氯化铜浓度下的液体培养基的吸光值来反映酵母菌的生长状况。结果表明不同浓度氯化铜对酵母的影响是不同的。 关键字：酵母菌、YPD固体培养基、YPD液体培养基、氯化铜、凝胶电泳 引言 酵母菌是人类直接食用量最大的一种微生物。酵母菌体含有丰富的蛋白质、脂肪、糖分和B族维生素等,以及酶、辅酶、核糖核酸、甾醇和一些新陈代谢的中间产物。有些酵母菌如酿酒酵母在嫌气条件下具有将糖转化为乙醇和二氧化碳的能力。 一、材料方法 1、1仪器 250mL三角瓶、500mL三角瓶、电子天平、玻璃棒、大小烧杯、100mL量筒、高压蒸汽灭菌锅、药匙、培养皿、分光光度计（带比色皿两只）、高速离心机 容量瓶 垂直平板电泳槽 1、2方法 吸光值的测定、超声波破碎、高速离心、聚丙烯酰胺凝胶电泳 1、3培养基 Ypd固体培养基（100mL） 取1g酵母膏 2g蛋白胨2g琼脂粉溶于 90mL蒸馏水震荡摇匀放入灭菌锅 121℃高温蒸汽灭菌20分钟； 20g葡萄糖加到100mL蒸馏水溶解后放入灭菌锅，115℃高温蒸汽灭菌20分钟； 将上述药品灭菌完成后，在超净工作台内，用移液枪取葡萄糖溶液10mL加入到培养液中混匀倒平板 Ypd液体培养基（100mL）: 取1g酵母膏 2g蛋白胨溶于 90mL蒸馏震荡摇匀后放入灭菌锅 121℃高温蒸汽灭菌20分钟； 20g葡萄糖加到100mL蒸馏水溶解后放入灭菌锅，115℃高温蒸汽灭菌20分钟； 将上述药品灭菌完成后，在超净工作台内，用移液枪取葡萄糖溶液10mL加入到未凝固的培养液中混匀。 氯化铜溶液:用电子天平称取氯化铜4.25g加入到50mL蒸馏水摇匀，放入4℃冰箱待用。 二、酵母的生长 2、1 酵母的活化 用电子天平称取安琪酵母0.1g加到100mL蒸馏水活化1分钟；在超净工作台内，用移液枪吸取0.1mL已活化的酵母溶液打进YPD培养基，用涂布器涂布，置于30℃的培养箱倒置培养24小时。如下图所示 2、2 纯化 培养结束后，用接种环在超净工作台内挑取培养基边缘的酵母菌，接种（划线法）在空白的培养板上，完成接种后，将培养基放到已设定温度为30℃的培养箱内倒置培养24小时。 如图所示 2、3氯化铜对酵母的影响 用无菌的接种环挑取单菌落用划线法分别在含25mmol/L氯化铜YPD培养基和正常培养基上进行接种，将接种的培养基倒置放于30℃的培养箱培养24小时，进行拍照观察。 2、4 液培 从上述不含氯化铜的培养基中取一环酵母接种到100mL的液体YPD培养基，并在30℃的摇床上以180r/min的转速培养12小时。 从上一步的液体培养基中用移液枪吸取10ul菌液加入到100mL的无菌水。之后再取0.1mL于ypd培养基上进行涂布培养，其培养温度为30℃，培养时间为24小时。 从涂布的培养基上用无菌枪头挑取单菌落，在超净工作台内打入到30mL的液体YPD培养基，在摇床上培养12小时，设定其转速为180r/min,培养温度为30℃.待12小时后，测定吸光度。 2、5吸光度的测定 首先以未接酵母菌的培养液为基准，即以此为校零的标准。将分光光度计调到