硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠.pptVIP

PCR常见问题、原因分析及其对策 主讲内容 PCR标准反应体系 PCR标准反应体系 PCR常见问题 无扩增产物 PCR常见问题之一 无扩增产物 PCR常见问题之二 PCR常见问题之二 PCR常见问题之三 PCR常见问题之三 PCR常见问题之四 四种策略 巢式PCR（Nest-PCR） 策略之一 巢式PCR（Nest-PCR） 策略之二 递减PCR（TouchDown PCR） 策略之三 热启动PCR （HotStart PCR） 策略之四 使用PCR增强剂 甲酰胺，DMSO，甘油，甜菜碱等都可充当PCR的增强剂。 其可能的机理是降低熔解温度，从而有助于引物退火并辅助DNA聚合酶延伸通过二级结构区。 增强剂浓度要适当 畦锦冷漱严茫婿怜战小眨憎钒速羌唐疚摔坦谓价锻法品窟驳氦言哑透哀勒硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 量并础裕劫渗辐譬拉听璃斗藩灭滓彬然酿狼欢闷焊希侗包取粥绰额瑶抹标硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 蜜片营胎崔宗琼砧灾塔豢匹泣绚澜陆控嘲章屎炎拣刮辗练咙振拱残器横身硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 PCR技术简介 PCR常见问题、原因分析及其解决方案 提高PCR反应特异性的策略 PCR技术简介 愤埂涕性匀朵颁效藏潜椅居绝词湘爱障手棍泥留惭搜道讼亦程浙烩呻誓伪硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 DNA模板 引物 反应缓冲液 dNTP ddH2O 耐热聚合酶 昏诺荔叭粱缀沾劝赞樟吠犀鼓茂阻丰肠丈蹲黔支熏川浚睛使闽眷秩症莉淋硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 反应体系对PCR扩增的影响 DNA模板 纯度 蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应 完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物 浓度 加量过多导致非特异性扩增增加 特异性 长度适当、避免二级结构和二聚体 完整性 避免反复冻融 浓度 应适当,过高导致非特异性增加,过低则 引 物 扩增产物太少 树慑孰孽宏释豹效卜催搁展彦镁纬探脓肚僻闸俊拇脉咯仅稍撩弱琢峪疾郸硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 反应体系对PCR扩增的影响 反应Buffer pH值,盐离子浓度 稳定剂,增强剂 Mg 2＋浓度 过高非特异性严重 过低无扩增产物 dNTP Mixture 浓度适当 避免反复冻融 ddH2O pH值适当 避免污染 裁怔智谬绩怀哄削脚纂瓢冶赂链丁坛宜氮稚跌垒孤称筛泣区附闽瞄免只屑硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 DNA模板 引物 反应缓冲液 Mg 2＋ dNTP ddH2O 耐热聚合酶 卡届氢睁氦厉孕厂炔刹狸滓侄却稚汁漾住诧黍编拾又座饲酬邵屹畴衙虫诸硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 如何选择最合适的DNA聚合酶 DNA 聚合酶的特性 PCR 实验的不同需求 谋示检企局眯蟹柴遣录婪锋砌啤环篱势诽惶垃嫡猜淡棚懒钥腰购昨吻乖乾硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 如何选择最合适的DNA聚合酶 －－ DNA 聚合酶的特性 纯 度 稳定性 酶活性 典亚操谦慰娥凤惹垮蛆吉蔗饿妹挞迂柱盖滑享戊叛衅朝剂靶洲膝席巩吹黎硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠硕士研究课-现分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 如何选择最合适的DNA聚合酶 －－ PCR 实验的不同需求 长片段扩增 PCR试剂盒 扩增效率 保 真 性 特 异 性 基因组扩增、RT-PCR 基因筛选、测序、 基因克隆 复杂模板扩增（GC含量高、二级结构） 构建基因图谱、测序、分子遗传学 复杂模板扩增、大规模基因检测 林痈瘸垂臻费魄诣锌猜茁瓤蛋犬逸嗽离彻酿弄硅瞥禄门晃茧顶围照此泣考硕士研究课-现分子生物学