酵母核糖核_酸的提取及组分鉴定-卢忠燕.pptVIP

Biochemical experimental technology Biochemical experimental technology Biochemical experimental technology 实验七 酵母核糖核酸的提取 核 酸(nucleic acid) 是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。 Nucleic Acid 基因的化学本质——核酸 核酸的分类及分布 90%以上分布于细胞核，其余分布于核外如线粒体，叶绿体，质粒等。 分布于胞核、胞液。 (deoxyribonucleic acid, DNA) (ribonucleic acid, RNA) 脱氧核糖核酸 核糖核酸 携带遗传信息，决定细胞和个体的基因型(genotype)。 是DNA的转录产物，参与细胞内DNA遗传信息的表达。 除RNA病毒以外，所有有机体的遗传物质（基因）都是DNA。 一、实验目的 1. 掌握从酵母中提取核糖核酸的原理。 2. 学会核糖核酸提取的基本操作。 二、实验原理 酵母，即酵母菌，是一些单细胞真菌，是人类文明史中被应用得最早的微生物，繁殖速度快，生长周期短，其细胞质中的核酸大部分是RNA，而DNA很少；RNA提取液与菌体分离比较容易，所以生产中常选用酵母作为RNA提取的原材料。 工业上提取RNA的方法主要有三种，包括稀碱法、浓盐法和自溶法。本实验采用的是稀碱法。稀碱法是利用RNA可溶于碱性溶液的性质，先使RNA溶于稀NaOH溶液中，然后再利用核酸不溶于乙醇的性质，向溶液中加入酸性的乙醇溶液，从而使RNA沉淀出来，如此得到的即是RNA的粗制品；再用乙醇、乙醚等有机溶剂洗涤脂类杂质，即得到纯化的RNA。 三、 实验步骤 1. 酵母RNA的提取 (1) 准确称取15g酵母，加入干净的研钵中,加入适量石英砂；然后，向研钵中加入30-40mL0.04M的NaOH溶液，并用力研磨约10min。 (2) 待研磨均匀后，将钵中溶液倒入锥形瓶中，并再取30-40mL0.04MNaOH溶液洗涤研钵，一并转入锥形瓶中，然后放于沸水浴中加热20-30min，取出冷却。 2.酵母RNA分离及沉淀 将锥形瓶中溶液转移到100ml离心管中，在4200rpm离心8-15min后，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中，边倾倒边轻轻搅拌，待RNA沉淀完全后，3500rpm离心3-5min，弃上清，沉淀即为RNA粗制品。 3.洗涤及干燥（1） 向离心管中加15-20ml的95%乙醇，轻摇后，静置3-5min, 3500rpm离心3-5min，弃上清，留沉淀。 （2）再加入15-20ml乙醚，轻摇后，静置3-5min, 3500rpm离心3-5min，弃上清，沉淀即为酵母RNA。 四、 实验结果 将提取的RNA在空气中或用吹风机风干，称重，计算RNA的含量。 参考公式如下： 实验八 核糖核酸的组分鉴定 核酸 (DNA和RNA) 核苷酸 核苷和脱氧核苷 磷酸 戊糖 碱基 嘌呤 嘧啶 核糖 脱氧核糖 核酸组成 分子组成 碱基(base)：嘌呤碱，嘧啶碱 戊糖(pentose)：核糖，脱氧核糖 磷酸(phosphate) 核苷酸是构成核酸的基本组成单位 碱基 苦——碱基 甜——戊糖 酸——磷酸 一、实验目的 掌握核糖核酸组分鉴定的原理。 学会鉴定核糖核酸组分的方法。 二、实验原理 核糖核酸的组成成分主要包括核糖、磷酸和碱基。 在碱性环境下，嘌呤碱能与银离子反应形成沉淀，但此处碱性环境不能用一般的强碱，否则强碱会与银离子反应产生沉淀而干扰结果判定。 3. 核糖核酸与浓盐酸共热时，会发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者可与3，5-二羟基甲苯（地衣酚）反应，在Fe3+或Cu2+催化下，生成绿色复合物。 4. 磷酸组分可与定磷试剂在酸性环境中反应，生成蓝色物质。因此，可以根据以上性质，设计实验对各组分进行鉴定。 三、 实验步骤 1. 取200-500mg实验七中提取的酵母RNA，加入1.5M H2SO4溶液10mL，在沸水浴中加热10-20分钟，使核酸充分水解后，用于对各组分的鉴定。 2. 磷酸组分鉴定：取水解液1mL，加入干净的试管中，再加入等体积的新配制的定磷试剂1mL，混匀后，在45℃左右的水浴中加热15-30min，观察颜色变化。 3. 嘌呤碱的鉴定：取水解液1mL，加入干净的试管中，加入过量的浓氨水，再加入1mL的0.1M的硝酸银溶液，观察沉淀的生成。 4. 核糖的鉴定：取水解液1mL，加入干净的试管中，再加入2mL三氯化铁-浓盐酸溶液和0.2mL苔黑酚-乙醇溶液，放置在沸水浴中加热10-3