动物细胞培养基本技术与原理要点.pptVIP

方法： ①取一定量组织置于小烧杯中，先用BSS漂洗2~3次去掉血污，然后反复剪成0.5~1mm3的小块。 ②加入1~2ml培养液，用吸管轻轻吹打，使组织块悬浮。 ③移入培养瓶，并在瓶壁上吹匀。翻转，使有组织块的瓶壁朝上， 加入培养液，塞紧瓶口，置37℃温箱培养1~2h；待组织牢固贴于瓶 壁，再轻轻翻转，使培养液浸泡组织小块，静止培养。为促进细胞 贴壁，也可先在瓶内壁涂一层血清。 （四）悬浮细胞培养法(suspended cell culture) 利用旋转、振摇或搅拌的方法不让细胞贴壁，使其在培养液中 呈悬浮状态生长。 适用细胞：淋巴细胞、肿瘤细胞、传代细胞系 培养基：合成培养基 ＋ 5~10%血清 ＋ 0.1%甲基纤维素 培养细胞密度：5~7×105cell/ml. 特点：细胞增殖快，产量高，培养过程简单，是动物细胞大规模培 养的理想模式。 （五）微载体培养法(microcarrier culture) 载体：DEAE-交联葡聚糖微粒、DEAE-纤维素、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、无机玻璃基质微载体等 微载体培养系统培养细胞步骤： 1、选择合适的微载体类型——获得最大量的细胞，以微载体能全部悬浮在培养液内为最好 2、浸泡水化及消毒 用无Ca2+、Mg2+离子的磷酸缓冲液浸泡3h以上 3、接种（根据细胞类型决定接种浓度） 4