第八节酶的作用机制和酶的调节解决方案.ppt

第八节 酶的作用机制和酶的调节 一、酶的活性部位 (active site) 酶的活性部位 酶分子中促使底物发生化学变化的部位称为催化部位。 结合部位（Binding site）：酶分子中与底物结合的部位 或区域一般称为结合部位。 结合部位决定酶的专一性。 催化部位决定酶所催化反应的性质。 （一）酶的活性部位的特点 （1）活性部位在酶分子的总体中只占相当小的部分，通常只占整个酶分子体积的1%-2%。 （2）酶的活性部位是一个三维实体。酶的活性取决于活性中心的构象。 （3）酶的活性部位并不是和底物的形状正好互补，而是在酶和底物结合的过程中，底物分子或酶分子，有时是两者的构象同时发生了一定的变化后才互补的，这是催化基团的位置也正好在所催化底物键断裂和即将生成键的适当位置。 （4）酶的活性部位是位于酶分子表面的一个裂缝内。 （5）底物通过次级键较弱的力结合到酶上。 （6）酶活性部位具有柔性或可运动性。 （二）研究酶活性部位的方法 1）修饰剂浓度与酶失活或降低的程度是否成正比，如果成正比，则修饰位于活性中心内。 2）底物或可逆抑制剂与酶结合后能否再被修饰剂共价修饰，如果能被修饰，则修饰部位不在活性中心内。 须用氨基酸测序进行鉴定。 定点诱变法（site-directed mutagenesis） 二、酶催化反应的独特性质 （1）酶反应可分成两类，一类反应仅仅涉及到电子的转移，这类反应的速率或转换数在108 s-1数量级；另一类反应涉及到电子和质子两者或其他基团的转移，它们的速率在103 s-1 。 （2）酶的催化作用是由氨基酸侧链上的功能基团和辅酶为媒介。主要的是His，Ser，Cys，Lys，Glu和Asp的侧链常常直接参加催化过程。辅酶或金属离子与酶协同在一起发挥作用，比只利用氨基酸侧链来说，为催化基团提供了更多种类的功能基团。 （3）酶催化反应的最适pH范围通常是狭小的。 （4）与底物相比，酶分子很大，而活性部位通常只比底物稍大一些。因为在大多数情况下，只有活性部位围着底物，此外，一个巨大的酶结构对稳定活性部位的构象是必要的。 （一）临近定向效应 在酶促反应中，底物分子结合到酶的活性中心，一方面底物在酶活性中心的有效浓度大大增加，另一方面，由于活性中心的立体结构和相关基团的诱导和定向作用，使底物分子中参与反应的基团相互接近，并被严格定向定位，使酶促反应具有高效率和专一性特点。 邻近效应 （proximity effect）与定向排列 （orientation arrange）邻近指底物汇聚于酶的活性中心，使酶活性中心的底物浓度高于其它处，定向则指底物的敏感化学键与酶的催化基团正好对准，使反应加速进行。有利于提高反应速度。 定向效应包括 1）反应物的反应基团之间（双底物反应基团邻近） 2）酶的催化基团和底物反应基团之间 活性中心内定向使反应变成分子内反应 二羧酸单苯酯水解相对速率和结构关系 （二）底物的 “形变”和诱导契合 底物与酶结合诱导酶的分子构象变化，变化的酶分子又使底物分子的敏感键产生“张力”甚至“形变” ，从而促使酶－底物中间产物进入过渡态。 酶在发挥作用之前，必须与底物密切结合。 酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，进而相互结合。 酶的构象改变有利于与底物结合；底物在酶的诱导下发生变形，处于不稳定状态（过渡态），易受催化基团的攻击。 过渡态的底物与酶的活性中心结构最相吻合。 诱导契合 （三）酸碱催化 酸-碱催化可分为狭义的酸-碱催化和广义的酸-碱催化。酶参与的酸-碱催化反应一般都是广义的酸－碱催化方式。 广义酸－碱催化是指通过质子酸提供部分质子,或是通过质子碱接受部分质子的作用，达到降低反应活化能的过程。 酶活性部位上的某些基团可以作为良好的质子供体或受体对底物进行酸碱催化。 His 残基的咪唑基是酶的酸碱催化作用中最活泼的一个催化功能团。 （四）共价催化（covalent catalysis） （五）金属离子催化 （六）多元催化 ( multielement catalysis ) 酶促反应通常是几个基元反应协同作用的结果，包括酸碱催化、共价催化、金属离子催化等。 （七）活性部位微环境的影响 表面效应 ( surface effect ) 酶的活性中心形成疏水性口袋，防止水分子干扰酶与底物的结合。 上述七个因素，不是同时在一个酶中起作用，也不是一种因素在所有的酶中起作用。 四、酶的催化实例（一）溶菌酶(P394 ) 溶菌酶的作用是水解多聚糖链。 细菌细胞壁上的多聚糖被溶菌酶特异的水解从而破坏细菌细胞壁。 鸡蛋清中的溶菌酶由129个氨基酸残基构成，含4个二硫键，分子量14600。 溶菌酶广泛存在于微生物及动植物组织及分泌液中。 1922年，Fleming发现溶菌酶（青霉