第14章RNA的生物合成技术总结.pptVIP

转录和复制的区别 14.5 转录的选择性抑制 抗生素放线菌素D特异性抑制RNA聚合酶催化的RNA链的延长。 利福平特异性的与细菌RNA聚合酶的β-亚基结合，阻止转录的起始。 α-鹅膏蕈碱可阻断真核细胞RNA聚合酶II催化的mRNA合成 14.6 转录产物的加工 真核生物转录生成的RNA分子是初级RNA转录物(primary RNA transcript)，都要经过加工，才能成为具有功能的成熟的RNA。 为什么要加工 加工地点：主要在细胞核中进行。 外显子(exon)和内含子(intron) 外显子：在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列。 内含子：隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。 14.6.1 内含子剪接的4种类型 （1）第一类内含子的剪接 鸟苷的3’-末端与内含子的5’-末端结合，将外显子的3’-末端释放。 外显子的3’-末端攻击内含子的3’-末端进行相同的反应，将内含子切除，外显子相连。 主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的 rRNA基因 （2）第二类内含子的剪接 与第一类内含子剪接类似，只是第一步反应的不同。 亲核基团：内含子内部的一个腺苷酸残基的2’-OH 。 套索样中间体 也发现于线粒体、叶绿体，转录产物是mRNA （3）第三类内含子的剪接 通过同样的套索机制进行剪接，只是需要特殊的剪接体(RNA-蛋白复合物)发挥作用。大多数mRNA基因有此类内含子。 （4）第四类内含子的剪接 需要消耗ATP，由内切核酸酶水解内含子两端的磷酸二酯键，将两个外显子相连起来。是tRNA基因及其初级转录产物中的内含子属于此类。 14.6.2 rRNA前体的加工 原核生物rRNA基因经转录后形成30S的前体rRNA，经切割形成rRNA和tRNA前体，然后经特异酶的切割，释放出成熟的有功能的rRNA和tRNA。 转录 45S - rRNA 18S - rRNA 5.8S和28S-rRNA rDNA 内含子 内含子 28S 5.8S 18S 哺乳动物基因转录： 裂解 中间体 核酸酶 + 成熟RNA 5.8S-rRNA 28S-rRNA 核糖2’位发生甲基化 修饰酶 不同生物的rRNA 前体大小不同 14.6.3 tRNA前体的加工 （1）原核生物tRNA前体的加工 含有附加序列的tRNA前体 RNA pol TGGCNNAGTGC GGTTCGANNCC DNA ① 切割 RNaseP、核酸外切酶 ② 剪切和修剪 切除附加序列 tRNA核苷酸转移酶、连接酶 ATP ADP ③ 添加3’-端 CCA-OH （3）核苷内的转位反应 （2）还原反应 如：U ? DHU 如：U ? ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 如：A ? Am （1）甲基化 （1） （1） （3） （2） （4） ④ 核苷酸的修饰和异构化 （2）真核生物tRNA前体的加工 真核生物tRNA基因数目比原核生物多 转录出的都是tRNA前体 真核生物tRNA前体的加工需要切除内含子 14.6.4 mRNA前体的加工 原核生物转录出的mRNA无需加工，在转录尚未完成时就能进行翻译。 真核生物核内转录的初级mRNA称为杂化核RNA (hnRNA)，需要经过加工才能生成成熟的mRNA。 鸡卵清蛋白基因 hnRNA 首、尾修饰 hnRNA剪接 成熟的mRNA 鸡卵清蛋白基因及其转录、转录后修饰 5? GpppGp… GTP ppi 鸟苷酸转移酶 5? m7GpppGp… 甲基转移酶 SAM 5? ppGp… 磷酸酶 Pi （1）帽子结构的生成 帽子结构可提高mRNA的稳定性 加帽出现在hnRNA中，说明可能在细胞核中完成，并在剪接之前。 5? pppGp… hnRNA初级转录本 加入poly A之前，先由核酸外切酶切去3’末端一些过剩的核苷酸，然后加入polyA。 3’端修饰也是在细胞核中，在剪接之前进行的。 poly A的有无与长短，是维持mRNA作为翻译模板的活性，以及增加mRNA本身的稳定性。 （2）多聚A尾的生成 —— 除去hnRNA中的内含子，将外显子连接。 snRNP与hnRNA结合成为拼接体 ① 目 录 （3）mRNA的剪接 snRNA与蛋白质结合形成的小分子细胞核内核蛋白颗粒 GU-AG规则 ② UACUAAC - AG UG U4 U5 U6 E1 E2 U1 U2 U1、U4 无活性的剪接体 ③ UACUAAC - AG UG U6 E1 E2 有活性的剪接体 U5 分支点保守序列 剪接过程的二次转酯反应 外显子1 外显子2 内含子 第一次转酯反应 第二次转酯反应 内含子分支点中腺苷酸残基的2’-OH 选择性剪接：同一个初