2012色谱技术实验讲义解析.doc

实验一 中药提取液HPLC梯度洗脱条件的优化 一、目的 1．掌握高效液相色谱分析中，梯度洗脱条件的决定因素。 2．熟悉HPLC梯度洗脱条件优化的思路。 二、提要 对于成分复杂的中药提取液，测定其HPLC指纹图谱一般采用梯度洗脱的方法。而梯度洗脱条件主要受梯度范围（梯度起始浓度和终止浓度）、梯度斜度及强溶剂种类的影响。其中梯度范围和梯度斜度决定流动相的洗脱强度，可以通过调整梯度范围和梯度斜度，使样品组分的k’值符合1＜k’＜20范围；而强溶剂的种类决定流动相的选择性。本实验主要考察不同洗脱系统的溶剂强度对于梯度分离条件的影响。 三、实验条件 1．高效液相色谱仪； 2．ODS柱（C18, 4.6mm×150mm, 5μm或4.6mm×250mm, 5μm）； 3．流动相：乙腈－水；流速：1ml/min。 4．检测器：DAD检测器，检测波长254nm。 5．样品：大黄70%甲醇超声提取液 6. 进样量：20 μL 柱温：35 ℃。’分布范围在1～20之间。观察各组分的分离度。 3．分析实验结果，观察流动相起始浓度、终止浓度及浓度变化速率对各组分保留时间及分离度的影响。 五、思考题 1．梯度洗脱中，如果色谱峰集中在整个分析时间的中间段，即在洗脱的开始和结束的时间里没有组分出现，应如何调整梯度范围？ 答：初始浓度高点，中间段浓度变化速率慢点，终止浓度变小。 实验二 中药挥发油气相色谱