蕨菜黄酮类化合物的提取和分析.docVIP

蕨菜黄酮类化合物的提取与分析 摘　 要:用70 %乙醇提取蕨菜黄酮类化合物,得到粗黄酮,经聚酰胺纯化,得到精制黄酮。利用分光光度法测定了蕨菜粗黄酮、 精制黄酮中的黄酮含量,利用聚酰胺薄膜层析法及颜色反应并与标准品芦丁、 槲皮素的试验做比较。结果表明:蕨菜干粉中总黄酮含量为 7. 28 % ,粗黄酮、 精制黄酮中黄酮含量分别为27. 03 %和41. 25 %。蕨菜黄酮类化合物主要是黄酮和黄酮醇两类,其中含有芦丁成份。聚酰胺纯化有一定效果,但纯化过程中约70 %黄酮损失。 蕨菜别名拳头菜、 龙爪菜、 如意菜等,是药食两用植物,经常食用蕨菜会有一的保健作用。它是采自蕨科蕨属中的蕨 ( Pteridium aquilinum var . latiusculum )的幼嫩叶。作为药用,蕨菜具有清热滑肠,降气化痰,利水安神,降压等功效[9 ]作为食用,自古以来就被人们视为山珍野菜。如今更因其生长在山林野地,少受污染,并富含对人体有益的多种营养成分,而倍受人们青睐。对蕨菜黄酮的提取、 纯化及含量测定进行了研究,并进行了吸收光谱测定、 聚酰胺薄膜层析定性分析黄酮成分等若干分析,为蕨菜的深度加工与保健功能研究提供依据。近年来人们对蕨菜的常规营养成分及其采摘加工甚至人工栽培等方面都有了不少的研究，但是有关蕨菜黄酮类物质的研究却鲜见报道。 1 　 材料与方法 1. 1 　 材料 采摘蕨菜长出地面 15～20cm 高的幼嫩叶(嫩叶拳卷期)为试验材料。 采摘地点:六安市郊区的丘陵林地。 1. 2 　 仪器与试剂 TU21201 紫外可见光分光光度计,WFH2203 型三用紫外分析仪,HH24 数显恒温水浴锅,聚酰胺薄膜,芦丁,槲皮素,其余试剂均为国产分析纯。 1. 3 　 蕨菜黄酮的提取与纯化 1. 3. 1 　 蕨菜总黄酮的提取:新鲜蕨菜 70 ℃烘至 8 成干,然后剪成2～3mm碎段,再 103 ℃烘干后研成粉末状。准确称取一定质量蕨菜干粉,用索氏提取法(乙醚为抽提剂,45 ℃ 水浴)脱脂及除脂溶性色素,当乙醚抽提液无色时挥尽蕨菜粉中乙醚,将蕨菜放在烧瓶中加入 70 %乙醇回流提取蕨菜总黄酮:第一次浸提加入蕨菜干粉重量的 5倍体积70 %乙醇,以后每次浸提加入 3 倍体积 70 %乙醇,每次浸提约2h ,浸提温度为90 ℃,直到乙醇浸提液基本无色,共浸提10 次。合并所有浸提液并适当浓缩,定容至一定体积,按此体积1∶ 1 加入石油醚再次脱脂,弃上层石油醚,将下层乙醇浸提液定容至蕨菜干粉重量的 20 倍体积,此为蕨菜总黄酮提取液,简称为粗黄酮液。取一定体积粗黄酮液在水浴中进行减压浓缩成浆状并于103℃ 烘干,粉碎得到粗黄酮粉,可计算粗黄酮粉得率。 1. 3. 2 　 蕨菜黄酮的初步纯化:称取粗黄酮粉 1. 30g ,加水约100ml ,经水浴加热溶解后上聚酰胺柱(聚酰胺事先已105 ℃ 活化1h) ,装柱30cm高,柱内径为2. 5cm。上柱充分吸附后,先用蒸馏水洗至无色,然后用 95 %乙醇洗脱,洗脱速度约为 1. 5ml/ min ,洗脱至无色时为止,收集洗脱液在90 ℃ 水浴上蒸干后于 103 ℃烘 2h ,得粉末状精制黄酮粉,并可计算其得率。 1. 4 　 蕨菜黄酮提取物及芦丁的吸收光谱测定 取适量体积粗黄酮液用 70 %乙醇稀释,再取适量精制黄酮粉及芦丁分别用 70 %乙醇溶解,将上述三种黄酮液分别在可见光范围及紫外光范围,以 70 %乙醇为对照进行扫描,得到吸收光谱。 1. 5 　 蕨菜黄酮提取物的颜色反应 分别取0. 1g精制蕨菜黄酮粉、 0. 01g 芦丁用 70 %乙醇定容至100ml ,连同粗黄酮液共三个样,参照文献中方法[8 ,9 ,10 ,11]进行下面的定性颜色反应。 1. 5. 1 　 浓硫酸试验:分别取粗黄酮液、 精制黄酮液、 芦丁液约1ml 于试管中,加入浓硫酸数滴,混匀后,喷在滤纸上,吹干,观察现象。 1. 5. 2 　HCl2镁粉反应:分别取粗黄酮液、 精制黄酮液、 芦丁液约1ml 于试管中,加入少量镁粉,再加几滴浓 HCl ,沸水浴加热,观察现象。 1. 5. 3 　 AlCl3 反应:分别取少量粗黄酮液、 精制黄酮液、 芦丁液涂于滤纸上,吹干后喷 1 %的 AlCl3 乙醇液,再吹干,观察现象。 1. 5. 4 　FeCl3 反应:分别取粗黄酮液、 精制黄酮液、 芦丁液约1ml 于试管中,加入数滴 1 %的 FeCl3 水溶液,摇匀,观察现象。 1. 5. 5 　 氨水反应:分别取少量粗黄酮液、 精制黄酮液、 芦丁液涂于滤纸上,吹干,再将滤纸放在氨水上方熏 0. 5min左右,观察现象。 1. 5. 6 　NaOH试验:分别取粗黄酮液、 精制黄酮液、 芦丁液约1ml于试管中加入几滴1 %NaOH溶液,摇