实验须知和分光光度计的使用[精选].ppt

实验须知和分光光度计的使用 生化与分子生物学教研室 五、分光光度计原理 任何物质对光线都有吸收，而且每种物质都有其特有的吸收光谱。 相同物质在同一条件下，其吸收光谱的强度－吸光度 （A absorb ）与该物质的含量成正比例关系。因此把根据物质吸收光谱的特性进行定性或定量分析的方法称为吸收光谱法或分光光度法。 朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律： A＝-logI/I0=-logT=KCL A：光密度，吸光度，消光度。 　I：透过光强度。 I0：入射光强度。 T：透光度 　K：消光系数。 C：溶液浓度。 L：溶液厚度。 吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比 ７２１-Ｅ型分光光度计使用步骤 2.调到指定波长 4.放入黑体对光，调Ｔ＝０，拿出黑体 5.将空白液、标准液、待测液按顺序放入比色杯架，空白液置于光路中。 6.T=100% ；A=0 7.按Ｍｏｄｅ至Ａ，关盖，拉动比色槽，进行记录 8.取出比色杯，清洗 9.调Ｍｏｄｅ至Ｔ，比色槽归位 六、用分光光度法测定硫酸铜的浓度 硫酸铜标准液：4% 硫酸铜吸收峰：650nm * * 一、学生实验守则 实验前应认真预习，明确实验目的、步骤，回答老 师的提问。 进入实验室必须保持安静，不准高声谈笑，注意 环境卫生，不准吸烟，不随地吐痰，不乱抛纸屑 杂物，爱护公物。 实验时应严肃认真，专心细致，要准确记录实验 数据，严格遵守操作规程，节约水电和试剂，注 意安全，爱护实验仪器设备，如发生事故时，应 迅速停止实验，设法制止事态的扩大，并立即向 指导老师报告。 使用精密、贵重仪器，应先了解性能和操作方法， 未经老师同意，不得任意操作，违者按有关规定处 理。 实验中不准动用与本实验无关及他人使用的仪器 设备、材料和元件。如损坏丢失仪器、配件、工 具等，均应查清原因，及时上报，按已定的赔偿 办法办理；如隐瞒事故不报者，从重处理。 实验后要认真填写好实验报告(包括认真分析实 验结果、精确处理数据、图表)，如不符合要求 的实验报告，应退给学生重做。 实验完毕，由指导教师负责检查清点实验用的仪 器、工具。学生应办好交接手续，做好清洁卫生， 及时切断电源、关好水龙头，经指导教师同意后方　　　 　可离开实验室。 本守则由指导教师和参加实验的人员共同监督， 严格执行。 二、实验课平时成绩评分标准 实验课占期末总评的20%，其中操作考试和平时成绩各占10%。 平时成绩的得分包括以下六项：实验态度、实验纪律、实验操作、仪器爱护、实验报告及实验后清洗。 旷课者当次无实验成绩及得分。 请假一次扣除40分，二次及以上者每次扣70分，直至平时成绩扣完为止。 迟到或早退一次者扣除10分，二次及以上者每次扣除15分，直至平时成绩扣完为止。 将实验物品带离实验室者，除处以适当罚款外，扣除20分。 实验报告不按时完成者，扣除10分。 每次实验课后由带教老师评出该次平时成绩。 三、酸、碱及苯酚的急救处理 （一）酸 强酸如硫酸、硝酸、盐酸、王水（是硝酸与盐酸的混合物）等（其中硫酸作用最强，盐酸居末），对皮肤、粘膜的刺激和腐蚀作用极强。 皮肤损伤可用大量清水冲洗，或用4％碳酸氢钠溶液冲洗，再以生理盐水冼净，并按灼伤治疗。 若吸收了强酸立即选服2.5％氧化镁溶液或镁乳（75％氢氧化镁混悬液）、石灰水的上清液（含0.17氢氧化钙）、极稀的肥皂水、氢氧化铝凝胶、生蛋清、牛奶等。忌用碳酸氢钠及碳酸钠（因可产生大量气体导致胃穿孔）。 （二）碱 强碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、次氯酸钠、氧化钠、氧化钾以及腐蚀作用较弱的碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钙、氧化钙、氢氧化铵等，具有腐蚀性。 皮肤损伤可用大量清水冲洗。 若误吸收了强碱立即内服弱酸溶液如食用醋 （三）苯酚 不慎粘在皮肤上，以10%～4O%乙醇或聚乙二醇擦洗受染皮肤，再用清水冲洗至无苯酚味为止。也可用甘油、植物油擦洗皮肤，肥皂水、温水洗涤，灼伤部用饱和硫酸钠溶液或5％碳酸氢钠湿敷。 四、生化四大技术的介绍 分光光度法 电泳技术 层析技术 离心技术 L I I0 T＝I/I0 　　　透光率 A：吸光度、消光度、光密度 L I I0 标准液：已知的待测物质浓度。 A=KLC A标/A测=KLC标/KLC测 C测=C标ⅹA/A标 空白液 溶剂空白液： 欲测物有色其他无色 。 试剂空白液： 试剂不加样品。 样品空白液：