实验0口2 植物染色体综合分析.pptVIP

9、综合描述 ⑴计数体细胞染色体数目：统计细胞数≥30，85%具有恒定一致的数目； ⑵以分裂中期、高质量的体细胞染色体图像作为形态描述，以5个以上的细胞染色体，测其平均值。 ⑶核不对称系数(Ask)＝长臂总长÷全组染色体总长×100%。 ⑷染色体的长短：按Kuo等的方法，以染色体相对长度系数（I.R.L）组成划分染色体的长短，即I.R.L≥1.26为长染色体（L）；1.01≤I.R.L≤1.25为中长染色体（M2）；0.76≤I.R.L≤1.00为中短染色体（M1）；I.R.L﹤0.76为短染色体（S）。2n=24=8L+2M2+10M1+4S。 相对长度系数（I.R.L）= 每条染色体的相对长度÷染色体的平均相对长度。 ⑹染色体组型的公式：芍药 2n=2x=10=8M(2Sat)+2SM=6M+2SAT+2SM ⑺染色体组型模式图：根据各染色体的相对长度平均值绘制一坐标图。横轴上标明各染色体序号，每一染色体与其序号相对应，纵轴表示相对长度值(％)，零点绘在纵轴的中部，并与各染色体的着丝点相对应。此即为该细胞的染色体组型模式图。 ⑸染色体组型分类（Stebbins(1971)核型分类表） * * 一、实验目的 1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。 2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。 3.观察分析植物细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征；学习染色体组型分析的方法。 ? 实验二 植物染色体组型分析 二、实验原理 植物根尖有分裂高峰时间，把根尖固定，染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 各种生物染色体的形态、结构和数目都是相对稳定的。每一细胞内特定的染色体组成叫染色体组型。 染色体组型分析就是研究一个物种细胞核内染色体的数目及各种染色体的形态特征，如对染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体有无等观测，从而描述和阐明该生物的染色体组成，为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。 * 三、 实验材料和药品 1.材料：洋葱（Aillum cepa）的鳞茎，黑麦（Secale cereale），蚕豆（Vicia faba）的种子， 2.用具：载玻片，盖玻片，50ml烧杯，温度计，恒温水浴锅，试剂瓶，镊子，解剖针，吸水纸，剪刀，绘图纸，胶水等。 3.药品：Carnoy固定液，70％酒精，1mol/L盐酸，0.002~0.004 mol/L 8-羟基喹啉，饱和对二氯苯水溶液，0.05-0.2%秋水仙素，石碳酸品红染色液。 四、实验方法与步骤 （一）植物有丝分裂 1、材料处理 将黑麦或蚕豆种子用60 ℃的水浸泡12h后，换入20~30℃的水浸泡12h；置于23-25 ℃下发根（每日换水1次），待根长到1.5-2.0 cm左右时备用。将洋葱鳞茎置于盛有清水的小烧杯口上发根，待根长到1.5-2.0 cm左右时备用 在分裂高峰期前，剪下根尖，用0.004 mol/L 8-羟基喹啉，或对二氯苯饱和水溶液，或0.02％秋水仙素溶液中，预处理3—4h；或放入冰箱(0—4 ℃)中预处理24h。 （一）植物有丝分裂 2、材料固定 经过前处理的根尖，再放到Carnoy液中固定24h以内。固定材料可以转入70％酒精中，在4℃冰箱中保存，保存时间最好不超过2个月。 3、材料解离 方法：从固定液中取出根尖，用蒸馏水漂洗，再放到： ①1mol/L HCl中，在60℃水浴中恒温解离8—10min； ②用95％的酒精∶浓盐酸＝1∶1的溶液处理8—10min； 倒去解离液，用蒸馏水冲洗2~3次，使材料呈白色微透明，再置于蒸馏水中5min。 * （一）植物有丝分裂 5.制压 切取根尖分生组织放在清洁的载玻片，剥取分生组织，滴加1-2滴苯酚品红染液，染色8～12 min后加上盖玻片，覆以吸水纸压片，45%醋酸分色。 6．镜检观察 在低倍镜下寻找到处于减数分裂各个时期的细胞，转换至高倍镜下仔细观察，鉴别各分裂时期，观察减数分裂各时期细胞特征与染色体的形态结构、数目及行为变化。 * （二）核型分析 1、染色体数目统计 统计30个染色体分散良好的细胞，而且85%以上的细胞具有相同染色体数时, 确定该植物染色体数目。 2、显微照相 选取5个分裂中期细胞进行显微照相。要求染色体分散良好，着色鲜明，形态清晰。符合要求的细胞在400×倍下进行显微照相，制成染色体照片。在显微照相的同时，对镜台测微尺进行同样倍数拍摄，制成照片 ，然后根据照片上的实际长度，计算放大倍数。 * （二）核型分析 3、测量：依次测量放大照片各染色体长臂和短臂的长度（随体是否计入臂长须注明）。 根据测量、记录染色体形态测量数据计算： 绝对长度（μm）= 放大的染色体长度÷放大倍数 染色体组总长度 = 该细