2009基,因工程试题.docVIP

第章 重组克隆的筛选与鉴定 一、填空题 1． 重组体的筛选有两层涵义，一是将------------------------------，二 是将--------------------------------。 2． 目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为： (1)—------------—(2)—------------—(3)——--------------- (4)———————————等。 3． 噬菌斑形成选择法有两种判断标准，一是—---------------------------—，二是--------------------------------。 4． PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于—------------— 5． 核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为一-----探针和————————————探针。 6． 如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生3’突出的黏性末端，则可以用-------进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用—----------—进行3’末端标记。 7． 单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)—--------—(2)—-----------—(3)—-----------—。 8． 根据Northern杂交的结果可以说明：——-------------。 9． 差示杂交(differential hybridization)技术需要—------------—。 10．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射DNA探针杂交的技术称--------------——。 11．在——-----------技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。 12．—-------------—使用核酸探针检测细胞和组织中特定核苷酸序列的位置。 13．为了鉴定某一具有特殊功能蛋白质的结构，可以用一个容易检测的报告蛋白制备——，然后跟踪报告蛋白在细胞中的行为即可。 14．可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有——----和—-------—的活性。 15．硝酸纤维素膜(NC)结合DNA的能力为——，尼龙膜(Nylon)为 16．如果对一个克隆的基因进行遗传操作，使互补的链转录，会产生同正常的RNA转录物互补的—----------—分子。 17．在Southern印迹中，DNA转移的速度取决于--------------------------------和—---------------—. 18．根据噬菌斑的清晰程度筛选重组体主要是cI基因的一------------——. 19．用不对称PCR合成单链DNA探针时，两个引物的浓度比为：—---------------—. 20．微细胞是一种E．coli的突变体，通常只有正常细胞的——，而且不含——------. 21．点杂交的主要缺点是—----------------------—. 22．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)——-------(2)—--------------—(3)——-------------------。 23．阻断翻译杂交法是—------------—同—----------------—的杂交。 24．在切口移位标记探针时，DNAaseI处理DNA的温度应控制在—---------------—， 温度过高，—-------------------—，不利于标记. 25． Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别： (1)—-------------— (2)—---------------—. 26．放射免疫筛选的原理基于以下三点： (1)------------------—— (2)—---------—(3)—-----------—。 二、判断题 1． 以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体o 2． 核酸杂交探针就是带有放射性标记的DNA分子. 3． 在Northern杂交中，为了防止RNA形成部分环状发夹结构，影响迁移率，所以要用变性缓冲液进行电泳。 4． 探