PPO测定,参考上海市植物生理学会所编著方法.docVIP

PPO测定参上海市植物生理学会所编著方法[。5g果肉加10ml pH6.8磷酸缓冲液、少量PVP和石英砂，冰浴中快速研磨成匀浆，12000rpm，4℃，离心5min，上清液为PPO粗酶液。酶促反应体系包括0.5ml粗酶液、3.5ml磷酸缓冲液、1ml 0.1mol·L邻苯二酚、以煮沸失活粗酶液代替粗酶液在同样条件下测定为对照，测定1min内420nm处吸光值变化，以反应曲线的最初直线部分计算酶活，以每分钟吸光度变化0.01为一个酶活力单位。3.4.4 漆酶活性测定 。取5g果肉加10ml pH5.0醋酸缓冲液，冰浴中快速研磨成匀浆，12000rpm，4℃，离心5min，上清液为漆酶粗酶液。0.2ml粗酶液加入1.8ml醋酸缓冲液、1ml 5μmol·L-1 ABTS(λ420处消光系数：3.6×104M-1cm)，以缓冲液代替粗酶液在相同条件下测定为对照，测定3min内420nm波长处吸光值变化，以1min氧化1μmol·LABTS的酶量最为一个酶活力单位。3.4.5 PPO最适pH 以PPO活性高峰期的砀山酥梨果实为材料，提取粗酶液。在不同pH值（pH3.0、3.6、4.0、4.6、5.0、5.6、6.0、6.8、7.0、7.6、8）磷酸缓冲液各3.5ml中加入1ml 0.1mol·L邻苯二酚，0.5ml粗酶液，以煮沸失活粗酶液代替粗酶液在同样条件下测定为对照，测定1min内4