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雪上一枝蒿提取物对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用研究 答辩人：苏琴诗 班级：07级药学 学号指导老师：黄先菊 目录 第一部分：前言 第二部分：实验方法 第三部分：实验结果 第四部分：讨论与结论 第五部分：参考文献 前言 肿瘤的发病机制及治疗现状 雪上一枝蒿的药用作用概述 实验材料及细胞系 雪上一枝蒿根块购自安徽亳州，采用系统溶剂分离法提取分离，其醇提物及各个有效部位均为本实验组提供。 人肝癌细胞株HepG2购自武汉大学典藏物保存中心。 雪上一枝蒿五个提取部位分别为：氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，正己烷，水溶。 实验方法 肿瘤细胞的培养 MTT显色法测细胞活性 流式细胞仪测细胞凋亡 Hochest33258染色法测细胞凋亡 肿瘤细胞的培养 培养基：PRMI-1640，10%胎牛血清，青霉素，链霉素 培养箱：37℃，100%相对湿度，5%CO2 MTT显色法测细胞活性 实验原理： 四甲基偶氮唑盐(MTT)能被活细胞线粒体还原成蓝紫色的甲躜结晶物，而死细胞和红细胞则无这种能力，甲躜可溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，呈蓝色溶液，它的颜色可与活细胞数成正比，所以根据OD值来反映存活细胞的变化，从而推算出肿瘤细胞在化疗药中的存活率和抑制率。 实验方法 细胞消化，点板。 加药 加MTT反应 加DMSO显色 酶标仪测OD值 数据处理 流式细胞仪测细胞凋亡 实验原理： 实验操作：流式细胞仪检测雪上一枝蒿五个有效部位的细胞凋亡情况 Hoechest33258荧光染色法 实验原理： Hochest33258染料可以直接和细胞内的DNA结合，在荧光显微镜下发出蓝色荧光。凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 实验操作：用Hoechest33258检验雪上一枝蒿五个提取部位对HepG2的凋亡的影响。 实验结果 MTT显色法测细胞活性 IC??（μg/ml）：2831.605 药物种类 IC??（μg/ml） 正己烷部位 74.1677 氯仿部位 37.986 乙酸乙酯部位 112.8488 正丁醇部位 183.0931 水溶部位 1413.471 雪上一枝蒿氯仿不同提取副部位的细胞毒作用分析 药物名称 IC??（μg/ml） 氯仿12-15 158.0855 氯仿16-18 51.6175 氯仿19-20 85.3039 氯仿30-34 61.6277 药物名称 IC??（μg/ml） 正己烷10-13 43.0031 正己烷14-16 56.3051 正己烷17-18 259.1714 正己烷19-21 80.4979 正己烷29-33 128.9659 药物名称 IC??（μg/ml） 乙酸乙酯16-18 200.1244 乙酸乙酯19-20 98.8020 流式细胞仪检测结果 由图可知，经过雪上一枝蒿各个提取部位（200μg/ml）处理24小时后，除水溶部位，正丁醇提取部位外，肝癌细胞中坏死细胞，早期凋亡细胞，晚期凋亡细胞都有不同程度的增加，说明这几个部位能诱导细胞产生凋亡。 荧光显微镜结果 图1：对照组 图2：氯仿提取部位 图3：乙酸乙酯提取部位 图4：正丁醇提取部位 图5：水溶部位 图6：正己烷提取部位 讨论 本研究为抗肿瘤药物的相关筛选，经采用MTT法，流式细胞仪，荧光显微镜对雪上一枝蒿的水、氯仿、正己烷、乙酸乙酯和正丁醇的萃取部位进行体外抗肿瘤活性研究表明，雪上一支蒿提取物的上述各萃取部位对HepG2有不同程度的抑制作用，在给药后24 h有明显效果。氯仿部位对HepG2的最大抑制率为74.43%，正己烷部位最大抑制率为67.86%，两个部位的半数抑制率分别为37.986%和74.1677%，说明氯仿部位和正丁醇部位具有明