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微生物学实验技术-乳酸菌的分离与纯化-2009[精选]
实验九 乳酸菌的分离纯化 目的要求： 学习从新鲜酸乳中分离纯化乳酸菌的方法 学习乳酸的检测方法 基本原理： 选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物；加入某种指示剂，使待分离微生物在培养基中形成具有明显特征的菌落。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 实验器材： 菌种 市场销售的各种新鲜酸乳(辉山酸奶) BGC 牛乳培养基 脱脂乳试管培养基 脱脂乳粉 蔗糖 操作步骤： （一）乳酸菌的分离纯化 1.分离 培养基的配制 灭菌 倒平板 制备样品稀释液 接种（涂布法） 培养 BGC 牛乳培养基 （A）溶液：脱脂乳粉 100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚绿(B.G.C)乙醇溶液1mL,80℃灭菌20min。 （B）溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g，pH6.8, 121℃灭菌20min。 以无菌操作趁热将（A）、（B）溶液混合均匀后倒平板。 取市售新鲜酸乳稀释至10-6，取其中的10-4、10-5 、 10-6 3个稀释度的稀释液各0.2mL，分别接入BGC 牛乳培养基琼脂平板上，用无菌玻璃刮刀依次涂布，置40℃培养48h，如出现圆形稍扁平的黄色菌落及其周围培养基变黄者初步定为乳酸菌。 每组准备下列器材（灭菌） 1.培养基 A 溶液（500ml三角瓶，内装125ml） 2.培养基 B 溶液（500ml三角瓶，内装125ml） 3.试管6支（内装9ml水 ） 4.培养皿一包（9个） 5.移液管7支 7.玻璃刮刀2个 2.鉴别 选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40 ℃培养8 ~ 24h，若牛乳出现凝固，无气泡，呈酸性，涂片镜检细胞杆状或链球状（两种形状的菌种均分别选入），革兰氏染色呈阳性，则可将其连续传代4~6次，最终选择出在3~6h能凝固的牛乳管，作菌种待用。 脱脂乳试管培养基 脱脂乳粉与5%蔗糖水为1：10的比例配制，装量以试管的1/3为宜， 115℃灭菌15min。 每组配制脱脂乳试管培养基150mL，分装15支试管。 （二）乳酸发酵及检测 此部分实验内容为自主设计实验，要求如下： 1. 通过查阅文献资料，了解乳酸的检测方法； 2. 设计实验方案，检测你所分离出的微生物是 否产生乳酸。 3. 完成实验报告。 * * 1mL 琼脂培养基 每管各9mL无菌水 *
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